3. Nội dung nghiên cứu
2.3.1. Các hóa chất, thiết bị chuyên dùng
2.3.1.1. Thiết bị
- Tủ cấy (Esco, Singapore) - Máy lắc (MaxQ, Nhật Bản) - Đĩa petri (HTM, Trung Quốc)
- Cốc thủy tinh 250 ml (Bomex, Đức)
- Lọ thủy tinh 500ml, 1000ml (Bomex, Đức) - Ống Falcon 15 ml, 50 ml (Corning, Thụy Sỹ) - Đèn cồn (Việt Nam)
- Que cấy (Việt Nam)
- Đầu côn 200 µml và 1000µl (Eppendorf, Đức) - Pipetman (Eppendorf, Đức)
- Eppendorf 1,5ml và 2ml (Eppendorf, Đức) - Đĩa Elisa 96 giếng (SPL Life science, Thụy Sỹ)
2.3.1.2. Hóa chất
- Cồn (Trung Quốc) - Methanol (Sigma, Mỹ)
- Bacto-agar (Duchefa, Hà Lan) - Trypton (Duchefa, Hà Lan) - Yest extract (Duchefa, Hà Lan) - Glucose (Merck, Đức)
- NaOH (Trung Quốc) - HCl (Trung Quốc)
- Dimethyl Sulfoxide (DMSO) (Merck, Đức)
- 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) (Merck, Đức) - Sulforhodamine B (SRB) (Sigma, Mỹ)
- Môi trường nuôi cấy MB: Trypton 10g, Yest extract 5g, NaCl 10g, nước cất cho tới 1000ml, Bacto-agar 15g (Nếu pha môi trường đặc), pH=7.
- Môi trường Hansen: glucose 50g, tryptone 10g, KH2PO4 3g, MgSO4.7H2O 2g, nước cất 1000ml, Bacto-agar 15g (nếu pha môi trường đặc), pH=5,6.
2.3.1.3. Đối tượng thử hoạt tính
Các chủng vi sinh vật sử dụng được cung cấp từ ngân hàng chủng vi sinh vật kiểm định thuộc hãng Microbiologics, Mỹ: Escherichia coli ATCC®25922TM, Staphylococcus aureus ATCC®25923TM, Salmonella typhimurium ATCC®19430, Aspergillus fumigatus ATCC®46645, Candida albicans ATCC®24433.
Bảng 2.2: Danh sách và đặc điểm chính của các loài vi sinh vật thử nghiệm
TT Tên vi sinh vật Đặc điểm chính
1 Escherichia coli
Trực khuẩn hiếu khí tùy tiện, Gram âm; sinh trưởng thích hợp ở 5-400C, nhiệt độ thích hợp 370C, pH 7,2- 7,4, phát triển được ở pH 5,5-8. Khi gặp điều kiện thuận lợi, chúng phát triển nhanh về số lượng, độc lực, gây nhiễm đường tiêu hóa và gây bệnh tiêu chảy
2 Staphylococcus aureus
Gram dương, không di động, không sinh bào tử, sinh trưởng tối ưu ở 8-400C, pH=7,2. Gây tổn thương trực tiếp lên các cơ quan như da (nhọt da, áp xe, viêm mô tế bào), viêm đường hô hấp, tim, gây viêm màng não mủ, viêm khớp, gây ngộ độc thực phẩm.
3 Salmonella typhi
murium
Trực khuẩn dài 0,6-0,8 µm, di động, không vỏ, không tạo bào tử, nhuộm Gram bắt màu Gram âm. Nhiệt độ thích hợp là 370C nhưng có thể phát triển từ 6-420C, pH tối ưu là 7,6 nhưng vẫn phát triển ở pH 4-9. Vi khuẩn đường ruột, tác nhân gây bệnh nhiễm độc thực phẩm, thương hàn.
4 Candida albicans
Là một loại nấm men sinh sản bằng đơn bào nảy chồi; có thể có sợi nấm giả gồm các tế bào dài dính vào nhau bởi một điểm nhỏ và dễ gãy. Gây bệnh viêm nhiễm ở các vùng niêm mạc, da…
5 Aspergillus fumigatus
Là vi nấm thuộc chi Aspergillus ưa nhiệt cao, phạm vi thích ứng rộng, nhiệt độ sinh trưởng từ 12 đến 580C, thích hợp nhất ở 370C. Bào tử nảy mầm ở độ âm từ 88-90% và phát tán trong không khí. Là loại nấm gây bệnh cơ hội, chủ yếu trên phổi đối với người bị suy giảm miễn dịch.
- 03 dòng tế bào ung thư: + LU-1: Tế bào ung thư phổi + HL-60: Tế bào ung thư máu
+ SK-MEL-2: Tế bào ung thư biểu mô - Hợp chất DPPH