4. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn
3.3.1. Thảo luận về vector pBI121 và promoter 35S
Plasmid pBI121 có kích thước 13,0kb, có khả năng tự sao chép độc lập và tích cực trong tế bào vật chủ; có kích thước nhỏ, dễ nhận gen quan tâm, dễ xâm nhập và được sao chép; mang một số dấu hiệu chọn lọc giúp phân biệt các tế bào mang plasmid tái tổ hợp với các tế bào không có plasmid tái tổ hợp; tồn tại bền vững trong tế bào vật chủ. Các đặc tính này là cơ sở quyết định các thành phần chính của plasmid với: Gen quan tâm đợc gắn thêm đoạn khởi động và đoạn kết thúc; gen chỉ thị chọn lọc. Plasmid pBI121 là một dạng Ti-plasmid trong Agrobacterium tumefaciens đã được cải biến bằng cách loại bỏ gen gây độc và gắn vào gen kháng kháng sinh để chọn lọc phù hợp với việc chuyển gen vào tế bào thực vật.
Trong các nghiên cứu chuyển gen thực vật, promoter 35S được sử dụng rộng rãi nhờ khả năng hoạt động mạnh ở nhiều loại mô của cây hai lá mầm, tuy nhiên nó lại ít hoạt động ở cây một là mầm. Promoter 35S là một promoter mạnh được phân lập từ virus gây bệnh khảm lá súp lơ (Cauliflower Mosaic Virus - CaMV), promoter mạnh này có thể khởi động phiên mã cho gen trong tất cả các loại mô bào thực vật ở tất cả các giai đoạn sinh trưởng và phát triển. Promoter 35S dài 350bp, gồm 3 thành phần: Hộp TATA ( ở vị trí từ- 46 đến + 8); vùng tăng cường A (enhancer) từ vị trí - 90 đến - 46, làm tăng biểu hiện gen ngoại lai ở rễ; vùng tăng cường B (enhancer) từ vị trí -343 đến - 90, làm tăng biểu hiện gen chuyển ở lá [27].