STT Nồng độ gốc Nồng độ sử dụng 1 Tris-HCl 1M, pH 8 100 mM 2 NaCl 5M 1,4M 3 EDTA 0,5M, PH 8 50 mM 4 CTAB 2% (w/v)
5 Nước khử ion vô trùng
DNA tổng số được tách chiết từ lá đậu tương theo các bước sau: 1) Nghiền mẫu lá trong nitơ lỏng bằng cối chày sứ.
2) Bột đã nghiền cho vào ống Eppendorf 1,5 ml. Thêm 700µl đệm tách, đảo đều và ủ ở 65oC trong 90 phút.
3) Bổ sung 700µl hỗn hợp Chloroform : Isoamyl alcohol (tỷ lệ 24:1) vào mỗi ống, đảo đều sau đó ly tâm ở 13000 vòng/phút trong 15 phút.
4) Hút 500 µl dịch nổi pha trên sang ống eppendorf khác, bổ sung 500 µl isopropanol lạnh. Để mẫu trong tủ -20oC trong 30 phút.
5) Ly tâm thu 13000 vòng/phút ở 4oC trong 15 phút để thu tủa DNA, sau đó rửa tủa bằng cồn 70oC.
6) Loại bỏ cồn, làm khô tủa ở điều kiện nhiệt độ phòng và hòa tan DNA trong nước khử ion vô trùng và bảo quản ở -20oC.
Xác định sự có mặt của gen chuyển trong cây đậu tương chuyển gen ở thế hệ T0 bằng kỹ thuật PCR với cặp mồi GmDREB2-BamHI/Cmyc-SacI để khuếch đại gen GmDREB2 từ DNA hệ gen của các cây đậu tương chuyển gen ở T0. Xác định sự có mặt của vector pBI121-GmDREB2 trong cây đậu tương chuyển gen ở thế hệ T0 bằng kỹ thuật PCR với cặp mồi 35S-F/35S-R để khuếch đại đoạn 35S trong vector pBI121- GmDREB2 từ DNA hệ gen của các cây đậu tương chuyển gen ở T0. Trình tự nucleotide của că ̣p mồi GmDREB2-
BamHI/Cmyc-SacI và 35S-F/35S-R trình bày ở bảng 2.3.