a, Phương pháp khuếch tán trên đĩa thạch:
Các chủng vi khuẩn Vibrio sp được làm giàu trên môi trường APW, sau đó
hút dịch sinh khối vi khuẩn Vibrio sp đã được hoạt hóa lên đĩa petri chứa môi
trường thạch 2216E, sau đó chang đều cho đến khi khô hết. Đặt khoanh giấy có tẩm sẵn dịch nuôi, dịch chiết theo thời gian nuôi cấy chủng Pseudomonas sp và khoanh giấy có tẩm kháng sinh Tetracyclin làm đối chứng để xác định khả năng kháng khuẩn; các khoanh giấy có nồng độ PCN khác nhau 0,5µg, 1µg và 2µg để xác định nồng độ tối thiểu ức chế Vibrio sp của hoạt chất PCN. Đĩa được nuôi ở nhiệt độ thích hợp với từng chủng. Sau 24 giờ tiến hành xác định khả năng ức chế
Vibrio sp bằng cách đo đường kính vòng kháng khuẩn (D-d, mm); trong đó D là đường kính vòng vô khuẩn, d là đường kính khoanh giấy.
b, Phương pháp nuôi lỏng:
Các chủng vi khuẩn Vibrio sp được làm giàu trên môi trường APW, sau đó cho vào trong tủ lắc 30ºC, thời gian 24h để hoạt hóa chủng. Sau 24 giờ tiến hành thu sinh khối, xác định mật độ vi khuẩn bằng phương pháp đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch. Pha loãng dung dịch vi khuẩn với đậm độ pha loãng là 10-3, xác định mật độ vi khuẩn ban đầu bằng phương pháp đếm khuẩn lạc trên đĩa thạch , sau đó bổ sung hoạt chất với các nồng độ 0,5µg/ml, 1µg/ml và 2µg/ml và một mẫu đối chứng không bổ sung hoạt chất, nuôi lắc ở 30oC. Sau 6 giờ và 24 giờ thu mẫu, xác định mật độ vi khuẩn bằng phương pháp đếm khuẩn lạc, so sánh với mẫu đối chứng để xác định khả năng ức chế Vibrio sp.