vitro
Chúng tôi tiến hành xác định ảnh hưởng nồng độ hoạt chất PCN đến khả năng ức chế sự phát triển của hai chủng Vibrio alginolotycus Val 14.3 và Vibrio parahaemolytycus VP 14.3. Dịch vi khuẩn VP 14.3, Val 14.3 được cho vào 4 ống, bổ sung vào mỗi ống hoạt chất PCN với nồng độ lần lượt là 0µg/ml (mẫu đối chứng), 0,5µg/ml, 1µg/ml và 2µg/ml, nuôi lắc 30oC, xác định mật độ vi khuẩn bằng phương pháp đếm khuẩn lạc tại các thời điểm 0 giờ, 6 giờ và 24 giờ. Kết quả trình bày ở bảng 3.8.
Bảng 3.8: ảnh hưởng nồng độ hoạt chất PCN ức chế Vibrio in vitro
Mẫu chủng VK Nồng độ PCN µg/ml
Thời gian
0 giờ 6 giờ 24 giờ
Val 14.3 0 0,6.104 0,3.106 0,7.108 0,5 0,6.104 0,6.104 0,4.106 1 0,6.104 0,4.104 0 2 0,6.104 0,6.104 0 VP14.3 0 0,4.104 0,4.106 0,9.108 0,5 0,4.104 0,5.104 0,3.106 1 0,4.104 0,3.104 0 2 0,4.104 0,2.103 0
Biểu đồ 3.3:Ảnh hưởng nồng độ hoạt chất PCN ức chế V. alginolyticus
Biểu đồ 3.4: Ảnh hưởng nồng độ hoạt chất PCN ức chế V.parahaemolyticus
Sau 6 tiếng nuôi cấy ở lô đối chứng nồng độ 0 mật độ vi khuẩn từ 0,4- 0,6.104/ml tăng lên 0,3-0,4.106/ml. Với nồng độ 0,5µg/ml, sinh khối vi khuẩn không thay đổi đáng kể, mật độ vi khuẩn giữ như ban đầu 0,2- 0,6.104/ml. Nồng độ 2µg/ml có khả năng ức chế với V. parahaemolyticus, mật độ vi khuẩn giảm còn
0,2.103/ml. Sau 24 giờ mật độ vi khuẩn của mẫu đối chứng đạt mức 0,7- 0,9.108/ml; nồng độ 0,5 µg/ml chỉ có khả năng ức chế chậm phát triển vi khuẩn, mật độ vi khuẩn 0,3-0,4.106/ml. Khi sử dụng nồng độ 1-2µg/ml có khả năng diệt hoàn toàn vi khuẩn ở mẫu sau 24 giờ .
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
Kết luận
1. Từ môi trường nuôi thủy sản đã phân lập được 11 chủng PS5, PS8, PS9, PS10, PS11, PS12, PS39, PS40, PS41, PS42, PS43. Các chủng phân lập được có khả năng sinh sắc tố xanh trên môi trường King A. Các chủng được xác định là
Pseudomonas aeruginosa bằng PCR khuếch đại đoạn gen PA (956bp) đặc trưng
loài với cặp mồi đặc hiệu PA-F, PA-R và điều kiện phản ứng thích hợp.
2. Trình tự 16s rRNA của chủng PS39 có kích thước 1529bp, được đăng ký trên ngân hàng gen NCBI với mã số KJ579953. Trình tự gen 16s rRNA của chủng PS39 có độ tương đồng cao (trên 99%) với trình tự gen của một số loài thuộc loài
Pseudomonas aeruginosa trên ngân hàng gen NCBI. Chủng PS39 được xác định thuộc loài Pseudomonas aeruginosa.
3. Chủng P. aeruginosa PS39 cho sinh khối và nồng độ pyocyanin đạt tối đa sau 7 ngày nuôi cấy. Dịch nuôi và dịch chiết vi khuẩn P. aeruginosa PS39 có khả năng kháng các vi khuẩn Vibrio kháng kháng sinh gây bệnh trên tôm. Nồng độ pyocyanin ức chế hoàn toàn V. parahaemolyticus và V. alginolyticus sau 24 giờ là 2µg/ml.
Kiến nghị
Tiếp tục nghiên cứu kỹ hơn về hoạt chất PCN, đặc biệt là khả năng diệt khuẩn để thay thế thuốc kháng sinh cũng như thử nghiệm độc tính trên thủy sản.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tiếng Việt
1. Lê Trần Bình, Phan Văn Chi, Nông Văn Hải, Trương Nam Hải, Lê Quang Huấn (2003). Áp dụng các kỹ thuật phân tử trong nghiên cứu tài nguyên sinh vật Việt Nam. NXB KH&KT Hà Nội.
2. Đỗ Thị Hòa (1996). Nghiên cứu một số bệnh chủ yếu trên tôm sú (Penaeus monodon) nuôi ở khu vực Nam Trung Bộ. Luận văn P.TS. khoa học nông nghiệp.
3. Đỗ Thị Hòa, Bùi Quang Tề, Nguyễn Huy Dũng và Nguyễn Thị Muội (2004). Bệnh học thủy sản. NXB Nông nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh.
4. Bùi Quang Tề và Vũ Thị Tám. (1994). Những bệnh thường gặp ở tôm cá đồng bằng sông Cửu Long và biện pháp phòng trị bệnh. NXB Nông nghiệp TP Hồ
Chí Minh.
5. Hà Ký và ctv (1995). Nghiên cứu biện pháp phòng trị bệnh tôm cá. Tổng kết đề tài cấp nhà nước mã số KN-04-12, năm 1991 - 1995.
6. Đặng Thị Hoàng Oanh, Đoàn Nhật Phương, Nguyễn Thị Thu Hằng và Nguyễn Thanh Phương (2006). “Xác định vị trí phân loại và khả năng kháng thuốc kháng sinh của vi khuẩn Vibriophát sáng phân lập từ hậu ấu trùng tôm sú (Penaeus
monodon)”. Tạp chí Nghiên cứu Khoa học 2006: 42-52.
7. Bùi Quang Tề (1996). “Bệnh tôm cá và giải pháp phòng trị”. Tạp chí thủy
sản số 4/1996.
8. Bùi Quang Tề (1997). “Tình hình bệnh tôm cá trong thời gian qua và biện pháp phòng trị bệnh”. Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y – Hội thú y Việt Nam, tập
IV, số 2/1997.
9. Abdallah A.I. and Elahwel A.M. (2009). “Antibiotic resistance in
Pseudomonas aeruginosa isolated from various clinical specimens in IBN Sina
Hospital-Sirte-Libya”. Bull. Alex. Fac. Med. 45 No. 3, 2009, p 771- 775.
10.Akingbade O. A., Balogun S. A., Ojo D.A., Afolabi R. O., Motayo B. O., Okerentugba P. O. and Okonko I. O. (2012). “Plasmid profile analysis of multidrug resistant Pseudomonas aeruginosa isolated from Wound infections in South West,
Nigeria”. World Applied Sciences Journal 20(6): 766-775.
11.Al Hinai A.H., Al Sadi A.M., Al Bahry S.N., Mothershaw A.S., Al Said F.A., Al Harthi S.A. and Deadman ML (2010). “Isolation and characterization of
Pseudomonas aeruginosa with antagonistic activity against Pythium aphani
dermaturm”. J Plant Pathol 92:653–660
12.Angell S., Bench B.J., Williams H. and Watanabe C.M. (2006). “Pyocyanin isolated from a marine microbial population: synergistic production between two distinct bacterial species and mode of action”. Chem Biol 13:1349–1359
13.Anzai, et al. (2014). “Phylogenetic affiliation of the Pseudomonads based on 16S rRNA sequence”. Int J Syst Evol Microbiol. 50(Pt 4): 1563–1589.
14.AVI Biopharma (2007), Antisense antibacterial method and compound,
World Intellectual Property Organization.
15.Aziz L. M., Hamza S. J and Abdul-Rahman (2012). “Isolation and characterization of phenazine produced from mutant Pseudomonas aeruginosa”. J. Vet. Sci., Vol.: 5 No. 1; 42-53
16.Bakthavatchalu S., Shivakumar S., Sullia S.B. (2013). “Molecular detection of antibiotic related genes from Pseudomonas aeruginosa FP6, an antagonist
towards Rhizoctonia solani and Colletotrichum gloeosporioides”. Turk J Biol
17.Balcht, Aldona & Smith, Raymond (1994). Pseudomonas aeruginosa: Infections and Treatment. Informa Health Care. pg 83–84.
18.Baron S.S., Terranova G., Rowe J.J. (1981). “Antibiotic action of Pyocyanin”. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Dec. 1981, p. 814-820.
19.Baron S.S., Terranova G., Rowe J.J. (1989). “Molecular mechanism of the antimicrobial action of Pyocyanin”. Curr Microbiol 18:223–230
20.Botzenhardt K., and Doring G. (1993). Ecology and epidemiology of Pseudomonas aeruginosa . Pseudomonas aeruginosa as an Opportunistic Pathogen. p. 1-7.
21.Brown, RW (1956). Composition of Scientific Words. Smithsonian Institutional Press.
22.Chanratchakool et all (1994). Health Management in shrimp ponds. Published by Aquatic Animal Health Research Institute Department of Fisheries Kasrtsart University Campus. Jatujak. Bangkok. Thailand.
23.Collins FM (1955). “Effect of aeration on the formation of nitrate-reducing enzymes by P. aeruginosa”. Nature 175 (4447): 173–4.
24.Cooper M, Tavankar GR, Williams HD (2003). “Regulation of expression of the cyanide-insensitive terminal oxidase in Pseudomonas aeruginosa”. Microbiology 149 (Pt 5): 1275–84.
25.Cornelis P. (editor) (2008). Pseudomonas: Genomics and Molecular Biology (ấn bản 1). Caister Academic Press.
26.Costerton W., and Anwar H. (1994). “Pseudomonas aeruginosa: The Microbe and Pathogen”. Pseudomonas aeruginosa Infections and Treatment. p.1-
17.
27.Cox C. (1993). Iron and the Virulence of Pseudomonas aeruginosa . Pseudomonas aeruginosa : The Opportunist. p. 41-45.
28.Craig W., and Ebert S. (1994). “Antimirobial Therapy in Pseudomonas aeruginosa Infections”. Pseudomonas aeruginosa Infections and Treatment. p.
470-491.
29.Das T., Kutty S.K., Kumar N., Manefield M. (2013). “Pyocyanin facilitates extracellular DNA binding to Pseudomonas aeruginosa influencing cell surface
properties and aggregation”. PLoS One 8(3):e58299.
30.Delden C. (2004). Virulence Fators in Pseudomonas aeruginosa . Pseudomonas. pp. 1-7.
31.Enass G. Sweedan (2010). Study the effect of “Antibiotics on Pyocyanin production from Pseudomonas aeruginosa and Pyocyanin as Antibiotic against
different pathogenic bacteria” J. of university of anbar for pure science: Vol.4:NO.1
32.Essar D. W., Eberly L., Hadero A. & Crawford, I. P. (1990) “Identification and characterization of genes for a second anthranilatesynthase in Pseudomonas aeruginosa: interchangeability of the two anthranilate synthases and evolutionary
implications”. J Bacteriol 172, pp.884–900.
33.Fick, R. Pseudomonas aeruginosa —the Microbial Hyena and Its Role in
Disease: An Introduciton. Pseudomonas aeruginosa : The Opportunist. 1993. pp.
1-6.
34.Flegel TW (2012). “Historic emergence, impact and current a status of shrimp pathogens in Asia”. J Invertebr Pathol 110:166-173
35.Fontoura R., Spada J.C., Silveira S.T., Tsai S.M., Brandelli A. (2009). “Purification and characterization of an antimicrobial peptideproduced by
36.Gilardi G. (1985). “Cultural and Biochemical Aspects for Identification of Glucose-Nonfermenting Gram-Negative Rods”. Nonfermenting Gram-Negative Rods. 1985. p.17-24.
37.Gohain et al.(2006).”The purification, crystallization and preliminary structural characterization of FAD-dependent monooxygenase PhzS, a phenazine- modifying enzyme from Pseudomonas aeruginosa”.Acta Crystallographica
Section F Structural Biology and Crystallization Communications (Impact Factor: 0.55). 11/2006; 62(Pt 10):989-92
38.Hassan H. M. and Fridovich I. (1980). “Mechanism of the Antibiotic Action of Pyocyanine”. Journal of Bacteriology, Jan. 1980, 141(1): 156-163.
39.Hassanein W.A., Awny N.M., El-Mougith A.A. and Salah El-Dein S.H. (2009). “Characterization and antagonistic activities of metabolite produced by
Pseudomonas aeruginosa Sha8”. Journal of Applied Sciences Research, 5:392–
403.
40.Hassanein W.A., Awny, .M., El-Mougith, A.A. and Salah El-Dien, S.H (2009). “The Antagonistic Activities of Some Metabolites Produced by
Pseudomonas aeruginosa Sha8”. Journal of Applied Sciences Research, 5(4): 404-
414.
41.Hassett D.J. (1996). “Anaerobic production of alginate by Pseudomonas aeruginosa: alginate restricts diffusion of oxygen”. J. Bacteriol. 178 (24): 7322–5.
42. Herbert R. B., Holliman F.G. and Sheridan J. B. (1974). Biosynthesis of iodinin: incorporationof D- [1-14C]-, D- [6-14C]- and D- [1,6,7-14C3] shikimic acid. Tetrahedron Letters, 4201-4204.
43. Herbert R. B., Holliman F.G. and Sheridan J. B. (1976). Biosynthesis of microbial phenazines :incorporation of shikimic acid. TetrahedronLetters, 639-
44.Ho Sui S.J., Lo R., Fernandes A.R., Caulfield M.D.G., Lerman J.A., Xie L., Bourne P.E., Baillie D.L., Brinkman F.S.L. (2012). “Raloxifene attenuates
Pseudomonas aeruginosaPyocyanin production and virulence”. Int J Antimicrob
Agents 40:246–251
45.Hollstein U., Larry G. Marshall (1972). “Biosynthesis of phenazines”. J. Org. Chem., 1972, 37 (22), pp 3510–3514
46.Hollstein U. and McCamey D. A. (1973). “Byosynthesis of phenazine. II. Incorporation of [6 - 14+C]-D-Shikimic acid into phenazine-1-carbocylic acid and iodinin”, J. Org. Chem., 38: 3415-3417.
47.Iglewski BH (1996). Pseudomonas. In: Baron's Medical Microbiology
(Baron S et al., eds.) (ấn bản 4). Univ of Texas Medical Branch.
48.Irasema E. Luis-Villaseñor, Ángel I. Campa-Córdova, Nolberta Huerta- Aldaz, Antonio Luna-González, José M. Mazón-Suástegui1 and Francisco Flores- Higuera ( 2013). “Effect of beneficial bacteria on larval culture of Pacific whiteleg shrimp”. Litopenaeus vannamei African Journal of Microbiology Research Vol.
7(27), pp. 3471-3478, 5 July, 2013
49.Jamileh Nowroozi (2012). “Pyocyanine Biosynthetic Genes in Clinical and Environmental Isolates of Pseudomonas aeruginosa and Detection of
Pyocyanine’s Antimicrobial Effects with or without Colloidal Silver Nanoparticles”. Cell Journal (Yakhteh), Vol 14, No 1, 7-18.
50.Jesus G.M., Silvia G.A., Ana I.A. and Ftancisco R.V. (1999). “Use of 16s - 23s ribosomal genes spacer region in studies of prokaryotic diversity”. Journal Microbiol Methods. 36: 55 - 64.
51.Johnson, G., and Olsen, R. (1997). “Multiple Pathways for Toluene Degradation in Burkholderia sp. Strain JS150.” Applied and Environmental Microbiology, Volume 63. p. 4047-4052.
52.Jyoti Joshia, Jiraporn Srisalaa, Viet Hong Truong, Tung Chend, Bunlung Nuangsaenge, Orasa Suthienkulf, Chu Fang Lod, Timothy W. Flegela, Kallaya Sritunyalucksanaa, Siripong Thitamadeea, (2014). “Variation in Vibrio parahaemolyticus isolates from a single Thai shrimp farm experiencing an
outbreak of acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND)”. Aquaculture
Volumes 428–429, 20 May 2014, Pages 297–302.
53.Karpagam S., Sudhakar T., Lakshmipathy M. (2013). “Microbicidal response of Pyocyanin produced by P. aeruginosa toward clinical isolates of
fungi”. Int J Pharm Pharm Sci 5:870–873.
54.Kasozi D.M., Gromer S., Adler H., Zocher K., Rahlfs S., Wittlin S., Fritz- Wolf K., Schirmer R.H., Becker K. (2011). “The bacterial redox signaller Pyocyanin as an antiplasmodial agent: comparisons with its thioanalog methylene blue”. Redox Rep. 2011;16(4):154-65.
55.Kerr J.R., Taylor G.W., Rutman A., Hoiby N., Cole P.J. & Wilson R. (1999). “PseudomonasaeruginosaPyocyanin and 1-hydroxyphenazine inhibit fungal growth”. Journal of Clinical Pathology, 52: 385-387.
56.Khamdan K., Suprapta D.N. (2011). “Induction of plant resistance against soyabean stunt virus using some formulations of Pseudomonas aeruginosa”. J ASSAAS 17:98–105
57.Khare E., Arora N.K. (2011). “Dual activity of Pyocyanin from
Pseudomonas aeruginosa—antibiotic against phytopathogen and signal molecule
for biofilm development by rhizobia”. Can J Microbiol 57:708–713.
58.King E.O., Ward M.K., Raney D.E. (1954). “Two simple media for the demonstration of Pyocyanin and fluorescin.”. J Lab Clin Med 44 (2): 301–7.
59.Lederberg, Joshua et al (2000). “Pseudomonas. Encyclopedia of Microbiology”. Second Edition, Volume 3, San Diego, 2000. p. 876-891.
60.Lightner D.V., Redman R.M., Pantoja C.R., Noble B.L., Tran L.H. (2012). “Early mortality syndrome affects shrimp in Asia”. Glob Aquacult Advocate
Jan/Feb 2012: 40. Editorial responsibility: Grant Stentiford, Weymouth, UK.
61.Lundgren B.R., Thornton W., Dornan M.H., Villegas-Peñaranda L.R., Boddy C.N., Nomura C.T. (2013). “Gene PA2449 is essential for glycine metabolism and Pyocyanin biosynthesis in Pseudomonas aeruginosa PAO1”. J Bacteriol 195:2087–3000
62.Millican R. C. (1962). “Biosynthesis of Pyocyanine”. Can. J. Microbiol. 9:
809-819.
63.Mohamed M. Gharieb, Mostafa M.El-Sheekh, Sabha M.El-Sabbagh, Walaa T.Hamza (2013). “Efficacy Of Pyocyanin Produced By Pseudomonas aeruginosa
As A Topical Treatment Of Infected Skin Of Rabbits”. Biotechnology Vol. 7, Issue 5.
64.National Center for Biotechnology Information site (NCBI) 65.P. aeruginosa PA14 Genomic Sequencing Project.
66.Pai S.S., Anas A.A., Jayaprakash N.S., Priyaja P., Sreelakshmi B., Philip R.,Mohandas A. & Bright Singh I.S. (2010). “Penaeus monodon larvae can be protected from Vibrioharveyi infection by preemptive treatment of rearing system
with antagonistic or nonantagonistic bacterial probiotics”. Aquaculture Research
41, p 847-860.
67.Parsons J.F., Greenhagen B.T., Shi K., Calabrese K., Robinson H., Ladner J.E. (2007). “Structural and functional analysis of the Pyocyanin biosynthetic protein Phz M from Pseudomonas aeruginosa”. Biochemistry 46:1821–1828
68.Pattamarat Rattanachuay (2010). “Inhibition of shrimp pathogenic Vibrios
by extracellular compounds from a proteolytic bacterium Pseudomonas sp. W3”. Journal of Biotechnology. Vol.13 No.1, Issue of January 15.
69.Pattamarat Rattanachuay, Duangporn Kantachote,Manee Tantirungkij (2010). “AntiVibrio compounds produced by Pseudomonas sp.
W3:characterisation and assessment of their safety to shrimps”. World J Microbiol
Biotechnol, DOI 10.1007/s11274-010-0529.
70.Pieper D., Stadler-Fritzche K., Scholomann M., and Knackmuss H. (1992). “Metabolism of 2-Chloro-4-Methylphenoxyacetate by Alcaligenes eutrophus JMP 134: Implications for the Degradation of Chloro- and Methyl-Substituted Aromatics via ortho Cleavage”. Pseudomonas Molecular Biology and
Biotechnology. 1992. p. 268-272.
71.Pierson L.S., Pierson E.A. (2010). “Metabolism and function of phenazines in bacteria: impacts on the behavior of the bacteria in the environment and biotechnological process”. Appl Micorbiol Biotechnol 18:1659–1670.
72.Porter R.C. (2009). Studies in pigment production by Pseudomonas aeruginosa. M.S. thesis, Texas Tech University, TX, 59 p.
73.Prabhakaran Priyajal (2012). Pyocyanin (5-methyl-1-hydroxyphenazine) Produced by Pseudomonas aeruginosa as Antagonist to Vibrios in Aquaculture:
Overexpression, Downstream Process and Toxicity National Centre for aquatic animal health Cochin University of science and technology Kochi 682016, Kerala, India Thesis Doctor of Philosophyin marine biotechnology. Chape 6 Toxicity of Pyocyanin on various biological systems, p. 94-127.
74.Prabhakaran Priyajal (2014). “Antogonistic effect of Pseudomonas aeruginosa isolates from various ecological niches on Vibrio species pathogenic to
crustaceans”. Journal of Coastal Life Medicine 2014; 2(1): 76-84.
75.Preetha R., Jose S., Prathapan S., Vijayan K.K., Jayaprakash N.S., Philip R. and Bright Singh I.S. (2010). “An inhibitory compound produced by Pseudomonas with effectiveness on Vibrio harveyi”. Aquaculture Research 41, 1452-1461.
76.Priest F.G. and Austin B. (1993). “Modern bacterial taxonomy”, Chapman and Hall, pp. 50 - 94.
77.Pseudomonas Genome Database.
78.Rabaey K., and Verstraete W. (2005). “Microbial Fuel Cells: novel biotechnology for enegy generation”. TrendS in Biotechnology, Volume 23.
79.Rojo F., and Dinamarca A. (2004). Catabolite Repression and Physiological Control. Pseudomonas. 2004. p. 365-366.
80.Ryan K.J., Ray C.G. (editors) (2004). Sherris Medical Microbiology (ấn bản 4). McGraw Hill.
81.Saha S., Thavasi R., Jayalakshmi S. (2008). “Phenazine pigments from
Pseudomonas aeruginosa and their application as antibacterial agent and food
colourants”. Res J Microbiol 3:122–128
82.Saosoong K., Wongphathanakul W., Paorsiri C., Ruangviriyachi C. (2009). “Isolation and analysis of antibacterial substance produced from Pseudomonas aeruginosa TISTR 781”. KKU Sci J 37:163-172
83.Scott Angell, Bennie J. Bench, Howard Williams (2006). “Pyocyanin Isolated from a Marine Microbial Population: Synergistic Production between Two Distinct Bacterial Species and Mode of Action”. Chemistry & Biology 13, 1349–
1359,
84.Sheeba J. (2007). “Isolation, pigment production, antifungal activity and antibiogram pattern of Pseudomonas aeruginosa” - a study. M.Phil., Thesis,
Bharathidasan University, 39 p.
85.Spilker T. et al (2004). “PCR-Based Assay for Differentiation of
Pseudomonas aeruginosa from Other Pseudomonas species Recovered from
86.Stanisich V., and Richmond M. (1075). “Gene Transfer in the Genus
Pseudomonas”. Genetics and Biochemistry of Pseudomonas. 1975. p. 170-175.
87.Stover K., Pham Q., Erwin L., Mizoguchi D., Warrener P., Hickey J., Brinkman L., Hufnagle O., Kowalid D., M. Lagrou, R.L. Garber, L. Goltry, E. Tolentino, S. Westbrock-Wadman, Y. Yuan, L.L. Brody, S.N. Coulter, Folger,R., Kas A., Larbig K., Lim R., Smith K., Spencer D., Wong K.,Wu Z., Paulsenk J., Reizer Z., Saier H., Hancock R., Lory S., and Olson V. (2000). “Complete genome sequence of Pseudomonas aeruginosa PA01, an opportunistic pathogen”. Nature.
2000. Volume 406. p. 961-964.
88.Sudhakar T., Karpagam S., Shiyama S. (2013). “Antifungal efficacy of Pyocyanin produced from bioindicators of nosocomial hazards”. Int J ChemTech Res 5:1101–1106.
89.Sweden E.G. (2010). Study the effect of “Antibiotics on Pyocyanin