Hợp chất 4 được phân lập dưới dạng dầu, không mà.Trên phổ 1H và 13C- NMR (hình 4.1.4a,b) cho thấy sự xuất hiện của 01 nhóm methyl bậc 3 tại [C12,21 (C-14)/ H 0,87 (3H, s, H-14)], 02 nhóm methyl bậc 2 tại [C 15,96 (C-12) và 21,05 (C-13)/ H 0,81 (H-12) và 0,92 (H-13), mỗi tín hiệu 3H, d, j=7,0 Hz], 05 nhóm methine bao gồm 02 oxymethine tại [C 78,02 (C-1)/ H 3,41 (1H, m, H-1)], [C 67,72 (C-6)/ H 3,43 (1H, t, j=10 Hz, H-6)].
Hình 4.1.4b. Phổ 13
C-NMR của hợp chất 4
So với số liệu phổ của hợp chất 2, thì tín hiệu đặc trưng của nhóm exomethylene không có trên phổ của hợp chất 4. Phổ 1H- và 13C-NMR của hợp chất 4 vẫn xuất hiện tín hiệu của 05 nhóm methylene trong đó có 01 nhóm methylene chuyển dịch
về phía trường thấp hơn so với các methylene khác, số liệu tương ứng là [C 51,71 (C-15)/H 2,78 (1H, d, j=3,5 Hz, H-15a) và 3,21 (1H, dd, j=3,5, 2,0 Hz, H-15b]. Với sự xuất hiện các tín hiệu nêu trên, cùng với sự có mặt của 15 carbon cho thấy hợp chất vẫn thuộc dạng sesquiterpene eudesmane [9], các số liệu về độ chuyển dịch hóa học và các hằng số tương tác giữa proton H-5, H-6 cho thấy hợp chất có liên kết
giữa 2 vòng cyclohexane ở dạng trans, khi đó cả H-5 và H-7 ở dạng , H-6 ở dạng tương tự nhưhợp chất 2.
Tiếp tục phân tích tiếp các tương tác 1H-13C thu được từ việc phân tích phổ HSQC (hình 4.1.4c) của hợp chất 4, các số liệu thu được trình bày trên bảng 4.4.
Bảng 4.4. Số liệu phổ NMR của hợp chất 4 C C a C b C c,d H c,e dạng pic (J = Hz) HMBC(1H13 C) 1 78,05 78,4 78,02 3,41 m 2 29,32 29,6 29,30 1,75 m/1,92 m 3 33,27 33,5 33,36 1,32 m/2,08 m 4 61,61 61,9 61,73 - 5 46,77 50,0 49,85 1,65 d (10,0) 6 67,65 67,9 67,72 3,43 t (10,0) 7 49,65 49,9 49,68 1,24 m 8 17,96 18,2 18,05 1,20 m/1,52 m 9 36,82 37,0 36,88 1,17 m/1,87 m 10 41,92 42,2 42.01 - 11 25,01 25,2 25.11 2,22 m 12 15,91 16,2 15.96 0,81 d (7,0) 7, 11, 13 13 20,99 21,3 21.05 0,92 d (7,0) 7, 11, 12 14 12,14 12,4 12.21 0,87 s 1, 9, 10 15 51,58 51,9 51.71 2,78 d (3,5) 3,21 dd (2,0; 3,5) 3, 4
aC của hợp chất 4α,15-epoxyeudesmene-1,6α-diol [17], bC của hợp chất 4β,15-epoxyeudesmene-1,6α-diol [33], cĐo trong dung môi CDCl3, d125 MHz, e500 MHz.
Hình 4.1.4d. Phổ HMBC của hợp chất 4
Các nghiên cứu của tác giả Alan F. Thomas và cộng sự cho thấy methylene carbon tại C-3 của các hợp chất sesquiterpene eudesmane bị ảnh hưởng bởi hai yếu tố chính, yếu tố thứ nhất là hiệu ứng của liên kết đôi ngoại vòng, hiệu ứng này sẽ làm cho độ chuyển dịch hóa học 13
Ccủa C-3 về phía trường thấp, với giá trị C
+8,5 ppm so với độ chuyển dịch hóa học 13Ccủa C-3 của vòng cyclohexane C 26,8. Yếu tố thứ hai là sự ảnh hưởng không gian của vị trí proton H-5 ở dạng axial, với giá trị C -5,5 ppm. Vì thế nếu trong phân tử có nhóm liên kết đôi ngoại vòng và proton H-5 ở vị trí axial thì độ chuyển dịch hóa học 13Ccủa C-3 tương ứng C 30,2 hoặc 30,8 ppm đối với kiểu cis [31], tương ứng 34,3 hoặc 35,0 ppm đối với kiểu
trans [35]. Phân tích số liệu độ chuyển dịch hóa học 13Ccủa hợp chất 4 tại vị trí C-3 (C 33,36), vị trí này bị ảnh hưởng bởi vị trí proton H-5 ở dạng axial, không có ảnh hưởng của hiệu ứng của liên kết đôi ngoại vòng. Rõ ràng liên kết đôi ngoại vòng đã được thay thế bằng nhóm epoxy. Các phân tích trên phổ HMBC (hình 4.1.4d) cho thấy tương tác giữa proton H-15a (H 2,78) với C-3 (C 33,36) và C-4 (C 61,73) xác nhận sự có mặt của nhóm epoxy trên cấu trúc. Đồng thời so sánh độ chuyển dịch hóa học 13C tại vị trí C-4 (C 61,73) và C-15 (C 51,71) của hợp chất 4 với hợp
chất có nhóm epoxy tại vị trí C-4 (C 61,61) và C-15 (C 51,58) của 4α,15- epoxyeudesmene-1, 6α-diol [17] và vị trí C-4 (C 61,9) và C-15 (C 51,9) của 4β,15-epoxyeudesmene-1, 6α-diol khẳng định nhóm epoxy tại C-4, C-5. Tiếp tục phân tích các tương tác HMBC còn lại và so sánh độ chuyển dịch hóa học của các vị trí khác trên cấu trúc của hợp chất 4 với vị trí tương ứng trên cấu trúc 4β,15- epoxyeudesmene-1, 6α-diol thấy hoàn toàn phù hợp. Như vậy, hợp chất 4 là 4β,15-epoxyeudesmene-1, 6α-diol (hình 4.1.4e).
Hình 4.1.4e. Các tương tác HMBC chính và cấu trúc hóa học của hợp chất 4