Hợp chất 3 được phân lập dưới dạng dầu, không màu. Trên phổ 1H-NMR (hình 4.1.3a) cho thấy sự có mặt của 02 nhóm methyl bậc 2 [ 0,88 (d, j=7,0Hz, H- 12), 0,96 (d, j=7,0Hz, H-13)], 01 nhóm methyl bậc 3 [1,00 (s, H-14)], 01 nhóm oxymethine [3,83 (dt, j=10, 2,5Hz, H-6)], 01 nhóm exomethylene [5,00 (br s, H- 15a) và 5,26 (br s, H-15b].
Hình 4.1.3a. Phổ 1
Trên phổ 13C-NMR (hình 4.1.3b) và phân tích phổ HSQC (hình 4.1.3c) cho thấy tín hiệu của 01 carbon carbonyl [ 213 (C-1)], nhóm exomethylene carbon [
144,07 (C-4) và 110,10 (C-15)], 03 methyl carbon [ 16,18 (C-12); 21,01 (C-13) và 17,91 (C-14)], 04 methine carbon [ 55,54 (C-5); 67,09 (C-6), 49.08 (C-7) và 26,00 (C-11)], 04 methylene carbon [ 38,32 (C-2); 35,41 (C-3); 17,91 (C-8) và 31,50 (C- 9)], 01 carbon bậc 4 [ 50,10 (C-10)].
Với sự có mặt của 15 carbon và các đặc trưng nêu trên cho thấy hợp chất thuộc dạng sesquiterpene eudesmane với hai vòng cyclohexane liên kết tại vị trí C-5 và C-10 [9].
Hình 4.1.3c. Phổ HSQC của hợp chất 3
Tiếp tục phân tích tiếp các tương tác 1H-13C thu được từ việc phân tích phổ HSQC (hình 4.1.3c) của hợp chất 3, các số liệu thu được trình bày trong bảng 4.3.
Bảng 4.3. Số liệu phổ NMR của hợp chất 3 C Ca Cb,c Hb,d dạng pic (J = Hz) HMBC (1H 13 C) 1 213,2 213,28 - 2 38,3 38,32 2,40 m/2,65 m 3 35,4 35,41 2,37 m/2,60 m 4 144,4 144,07 - 5 55,5 55,54 2,11 d (9,5) 6 67,1 67,09 3,83 dt (2,5, 10,0) 7 49,1 49,08 1,25 m 8 17,9 17,91 1,23 m/1,58 m 9 31,5 31,50 1,56 m/1,79 m 10 50,1 50,10 - 11 26,0 26,00 2,23 m 12 16,2 16,18 0,88 d (7,0) 7, 13
13 21,0 21,01 0,96 d (7,0) 7, 11, 12
14 17,9 17,91 1,00 s 1, 9, 10
15 110,1 110,10 5,00 br s/5,26 br s 3, 4, 5
aCcủa hợp chất 6-hydroxy-eudesm-4(15)-ene-1-one, b đo trong CDCl3, c125 MHz, d500 MHz
Tiến hành các phân tích chi tiết các thông tin trên phổ HMBC (hình 4.1.3d) như đối với hợp chất 2 cho phép xác định sự có mặt của 01 carbon methin mang oxy tại C-6, carbon carbonyl tại C-1, nhóm isopropyl tại C-11, C-12 và C-13 và nhóm methyl góc liên kết với carbon bậc 4 tại vị trí C-10, 02 methin carbon tại vị trí C-5, C-7 và liên kết đôi ngoại vòng tại C-4 và C-15. Từ những dữ liệu nêu trên có thể khẳng định hợp chất 3 có hai vòng cyclohexane, liên kết giữa hai vòng cyclohexane tại vị trí C-5 và C-10, vị trí methyl ở C-10 ở dạng.
Hình 4.1.3d. Phổ HMBC của hợp chất 3
Các số liệu về độ chuyển dịch hóa học và các hằng số tương tác giữa proton H-5, H-6 cho thấy H-6 ở ngược phía so với H-5. Do nhóm isopropyl ở dạng equatorial đối với vòng cyclohexane [9], cùng với hằng số tương tác tại H-6 ở dạng doublet - triplet có thể giả thuyết hằng số tương tác tại H-6 bao gồm 02 J lớn và 01
chất 7-epi-eudesm-4(15)-en-1,6-diol [35] ở dạng doublet -doublet, trên hợp chất
2 ở vị trí tương ứng là triplet tương ứng với 02 giá trị J lớn (Jaa5,6 và Jaa6,7), trên hợp chất 6-hydroxy-eudesm-4(15)-ene-1-one ở vị trí tương ứng là doublet - doublet với J=9.8, 9.8 Hz [14]. Như vậy, có thể giả định vị trí nhóm hydroxy ở vị trí C-6 trên vòng B của hợp chất 3 có sự chuyển dạng qua lại từ dạng H-6 ở vị trí sang dạng H-6 ở vị trí và ngược lại. Do lượng chất 3 và điều kiện không cho phép nên không đo được phổ NOESY và chứng minh thêm cấu hình ở vị trí này.
Có thể nhận thấy độ chuyển dịch hóa học của các vị trí trên 3 khá tương đương với các vị trí tương ứng của hợp chất 3, ngoại trừ sự vắng mặt của tín hiệu H-1 [ 3.43 (dd, j=11,5; 4,5 Hz)]. Đồng thời độ chuyển dịch hóa học 13C của methyl carbon của hợp chất 3 tại vị trí C-14 ( 17.91), trong khi cùng vị trí đó ở các cấu trúc có liên kết giữa 2 vòng cyclohexane ở dạng trans tương ứng là C 13,0 (C- 14) đối với 7-epi-eudesm-4(15)-en-1,6-diol [35], C 11,5 (C-14) đối với eudesm-
4(15)-en-1,6-diol [5][ 8][ 35]. Như vậy hiệu ứng -gauche của nhóm hydroxy tại vị trí C-1 có ảnh hưởng lên độ chuyển dịch hóa học 13C của nhóm methyl tại vị trí C-14 đối với các hợp chất dạng sesquiterpene eudesmane đã không còn trên cấu trúc củahợp chất 3. Phân tích tương tác HMBC giữa proton H3-14 (H 1,00) với C-1 (C 213,28), C-5 (C 55,54), C-9 (C 31,50) và C-10 (C 50,01) khẳng định sự thay thế nhóm methine carbon bằng nhóm carbonyl tại vị trí C-1. Tiếp tục phân tích các tương tác HMBC và so sánh độ chuyển dịch hóa học của các vị trí còn lại trên cấu trúc của hợp chất 3 với vị trí tương ứng trên cấu trúc 6-hydroxy-eudesm-4(15)-en- 1-one thấy phù hợp [14]. Tuy nhiên, do vị trí nhóm hydroxy ở vị trí C-6 trên vòng B
của hợp chất 3 có sự chuyển dạng từ dạng sang dạng (và ngược lại) như đã phân tích nêu trên do vậy vị trí H-6 chưa xác định được đối với hợp chất 3. Với việc phân tíc phổ ở trên, hợp chất 3 được xác định là 6-hydroxy-eudesm-4(15)-ene-1-one (hình 4.1.3e).
Hình 4.1.3e. Các tương tác HMBC chính và cấu trúc hóa học của hợp chất 3