Đánh giá và chọn lọc môi trƣờng nuôi phù hợp, cải thiện tỷ lệ thành thục, sự hình thành tiền nhân và sự phát triển tiếp theo của tế bào trứng lợn.
Đánh giá và chọn lọc nồng độ tinh tối ƣu đối với khả năng hình thành tiền nhân và sự phát triển tiếp theo của phôi lợn thụ tinh ống nghiệm
Thí nghiệm 1: Đánh giá và chọn lọc môi trƣờng nuôi có tác dụng cải thiện tỷ lệ thành thục, sự hình thành tiền nhân và sự phát triển của tế bào trứng lợn. Trong thí nghiệm này, lô tinh sử dụng là tinh của lợn Landrace đông lạnh dạng cọng rạ đã đƣợc kiểm định.
Tế bào trứng lợn loại A, B sau khi thu xong đƣợc chia làm 3 nhóm với số lƣợng và chất lƣợng tƣơng đƣơng nhau chia vào 3 loại môi trƣờng nuôi thành thục NCSU 37 và TCM 199 bổ sung 10% FBS, TCM 199 bổ sung 10% pFF
Nhóm đối chứng: môi trƣờng NCSU-37 (MT1)
Nhóm thí nghiệm 1: TCM - 199 10% FBS (MT2) Nhóm thí nghiệm 2: TCM - 199 10% pFF (MT3)
– Đánh giá tỷ lệ thành thục của trứng lợn sau khi nuôi thành thục trong môi trƣờng NCSU 37 so với môi trƣờng có bổ sung 10% huyết thanh thai bò và môi trƣờng bổ sung 10% dịch nang trứng lợn.
Trứng lợn sau khi nuôi thành thục trong ba loại môi trƣờng đƣợc đƣa vào thụ tinh theo nhóm bằng tinh trùng đông lạnh - giải đông.
Thí nghiệm 2: Đánh giá và chọn lọc nồng độ tinh có ảnh hƣởng tối ƣu tới khả năng hình thành tiền nhân và sự phát triển của phôi lợn thụ tinh ống nghiệm
Trứng lợn đƣợc phân loại chất lƣợng theo phƣơng pháp của Leibfried và First (1979) [31], chia làm 3 nhóm là A, B1 và B2 nuôi trong môi trƣờng TCM 199 10% FBS. Trứng đƣợc thụ tinh với tinh trùng đông lạnh – giải đông của lợn Landrace, thử nghiệm 3 nồng độ tinh là 0,05 triệu, 0,1 triệu, 1 triệu tinh trùng /ml để tìm ra nồng độ phù hợp nhất.
Các chỉ tiêu theo dõi trong hai thí nghiệm là:
+ Tỷ lệ xâm nhập của tinh trùng, tỷ lệ hình thành tiền nhân, tỷ lệ thụ tinh bình thƣờng đƣợc đánh giá ở thời điểm 10 h sau khi thụ tinh.
+ Tỷ lệ phân chia đƣợc đánh giá ở ngày thứ 2 (ngày thụ tinh đƣợc đánh giá là ngày 0)
Các chỉ tiêu theo dõi
Tỷ lệ xâm nhập của tinh trùng vào tế bào trứng = số tế bào trứng đƣa vào thụ tinh/tổng trứng thí nghiệm
Tỷ lệ hình thành tiền nhân đực = số phôi có hình thành tiền nhân đực/số tế bào trứng có tinh xâm nhập
Tỷ lệ thụ tinh bình thƣờng = số tế bào trứng có một tinh trùng xâm nhập và đƣợc hoạt hóa
Số phôi chia = Số phôi chia giả định/tổng số trứng thí nghiệm Số phôi nang = Số phôi nang/tổng số trứng thí nghiệm
Số tế bào trung bình = Tổng số tế bào đếm đƣợc/số phôi nang.