Có hai phƣơng pháp đánh giá sự thành thục của tế bào trứng sau nuôi. Đó là phƣơng pháp đánh giá sự xuất hiện của thể cực thứ nhất và phƣơng pháp bằng nhuộm nhân.
*Phƣơng pháp đánh giá bằng sự xuất hiện thể cực thứ nhất.
Trứng sau khi nuôi trong môi trƣờng nuôi thành thục 44-46 giờ đƣợc tách sạch cumulus bằng các dùng men Hyaluroindaz sục qua cho tế bào cumulus tan một phần. Dùng kim thủy tinh có kích thƣớc phù hợp hút lên thổi xuống cho cumulus bong ra hết. Đánh giá sự thành thục của tế bào trứng bằng sự xuất hiện thể cực thứ nhất.
*Phƣơng pháp nhuộm nhân
Trứng lợn sau nuôi thành thục cũng đƣợc tách sạch lớp tế bào cận noãn (cumulus), rửa 2-3 lần trong môi trƣờng nuôi để sạch hết lớp tế bào cận noãn. Trứng sau đó đƣợc đƣợc cố định trên lam kính, đậy lamen và đƣa vào dung dịch cố định ethanol : acid acetic theo tỷ lệ 3:1 về thể tích (v/v) tối thiểu 3 ngày. Sau
f e
dung dịch Aceto glycerol (Acid acetic: glycerol: nƣớc = 1 : 1 : 3) tỷ lệ theo thể tích. Tiêu bản đƣợc quan sát dƣới kính hiển vi có độ phóng đại 100-400 lần. Dựa vào hình thái của nhân để đánh giá các giai đoạn phát triển nhân của tế bào trứng (Leibfried vcs., 1986) [30]. Có ba giai đoạn phát triển chính của nhân:
Trứng chƣa thành thục (Germinal Vesicle -GV): Màng nhân chƣa tan, thấy rõ nhân.
Trứng bắt đầu thành thục ( Metaphase I - MI): Màng nhân tan, Nhiễm sắc thể ở giai đoạn Metaphase I.
Trứng thành thục (Metaphase II - MII): Trứng ở giai đoạn này đã có thể thụ tinh, nhiễm sắc thể ở giai đoạn Metaphase II, có thể quan sát đƣợc thể cực thứ nhất.