Dụng cụ để thu buồng trứng lợn đƣợc chuẩn bị trƣớc từ phòng thí nghiệm bao gồm: kéo, găng tay cao su, phích giữ nhiệt, túi nilon, và dung dịch bảo quản buồng trứng. Dung dịch bảo quản buồng trứng là túi chứa nƣớc ấm đƣợc đƣa vào trong phích giữ nhiệt, đảm bảo nhiệt độ trong phích giữ nhiệt khoảng từ 32oC - 35oC. Buồng trứng đƣợc thu ngay sau khi con vật bị giết mổ và đƣợc vận chuyển ngay về phòng thí nghiệm, thời gian từ lúc con vật bị giết mổ đến khi tiến hành xử lý trứng khoảng từ 1 - 2 giờ
3.4.3 Phƣơng pháp thu trứng
Buồng trứng sau khi thu về phòng thí nghiệm đƣợc rửa sạch bằng nƣớc muối sinh lý ở 37oC 3-5 lần. Sau đó tiến hành thu các nang trứng có kích thƣớc từ 2-6mm nhƣng không thu những nang trứng có kích thƣớc quá to.
Hầu hết những tế bào noãn của những nang noãn này bắt đầu trƣởng thành nhƣng dừng lại ở pha giữa I (metaphase I – MI) của sự phân bào giảm nhiễm. Khả năng hoàn thành chuyển tiếp M 1 thành M 2 có thể đạt đƣợc ở những tế bào noãn đã đạt tới kích thƣớc đầy đủ của chúng và đã nén chặt hạch nhân (nucleolar compaction) (Yanagimachi, 1994) [54]. Nhiều nghiên cứu đã chứng minh ảnh hƣởng của kích thƣớc nang trứng tới khả năng thành thục ống nghiệm in vitro. Theo Quian vcs. 2001 [47], trứng lợn thu từ nang có kích thƣớc từ 5mm trở lên cho tỷ lệ thành thục tới 90,5%. Trong khi trứng thu từ nang có kích thƣớc 2-2,9mm cho tỷ lệ thành thục đạt 67,4%.
Có hai phƣơng pháp thu nhận trứng là hút trứng từ những nang noãn hoặc chọn lọc nang noãn rồi rạch để lựa chọn trứng. Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng phƣơng pháp rạch nang.
Phƣơng pháp thu trứng đƣợc tiến hành là phƣơng pháp rạch nang trứng để thu trứng. Dùng cán dao số 3, lƣỡi dao số 11 để thu trứng lợn. Dùng mũi dao chọc vào nang trứng, nhẹ nhành xoay khắp trong nang để giải phóng tế bào trứng. Phƣơng pháp này có ƣu điểm là thu đƣợc nhiều trứng hơn, tế bào trứng hầu nhƣ không bị ảnh hƣởng do tác động cơ học. Tuy nhiên trứng thu theo phƣơng pháp này có nguy cơ bị nhiễm cao hơn so với phƣơng pháp hút nang.
Sau khi thu xong dung dịch bao gồm: dịch nang trứng, trứng và các tế bào nang đƣợc đƣa vào ống 15 để vào trong tủ ấm khoảng 10 -15 phút cho trứng lắng xuống dƣới đáy ống. Dùng pipet hút bỏ đi phần nƣớc trong phía trên lấy
phần lắng phía dƣới cho vào đĩa nhựa petri vô trùng có chứa sẵn môi trƣờng thu trứng (TCM 199).
Trứng đƣợc thu dƣới kính hiển vi với bộ dây hút và kim có đƣờng kính thích hợp (đã đƣợc vô trùng). Trứng sau khi thu sẽ đƣợc rửa lại 3 - 4 lần trong môi trƣờng thu trứng (TCM 199), sau đó mới tiến hành phân loại trứng và đƣa vào môi trƣờng nuôi. Trƣớc khi đƣa vào môi trƣờng nuôi, trứng sẽ đƣợc rửa lại 3 lần trong giọt môi trƣờng nuôi cho sạch dung dịch rửa trứng và làm quen dần với môi trƣờng mới. Toàn bộ thao tác hút và thu trứng đều đƣợc thực hiện trong điều kiện vô trùng ở 37o
C.