c/ Định lượng cefixim trong sự có mặt của các cephalosporin khác
3.2.5.So sánh kết quả phương pháp định lượng đã xây dựng với phương pháp HPLC (BP 2008)
pháp HPLC (BP 2008)
Phương pháp HPLC được tiến hành tại phòng thí nghiệm của trung tâm kiểm nghiệm Dược phẩm- Mỹ phẩm Hà Nội trong khi phương pháp CZE được tiến hành tại phòng thí nghiệm của bộ môn Phân tích- độc chất trường đại học Dược Hà Nội.
Cách xử lý mẫu
Đối với viờn nộn: Cõn 20 viên lấy khối lượng, tính khối lượng bột thuốc trung bình của 1 viên, nghiền mịn.
Đối với bột pha hỗn dịch: Cân 10 gói bột, tính khối lượng bột thuốc trung bình của 1 gói.
Tiến hành định lượng
Chúng tôi tiến hành định lượng cefixim trong chế phẩm theo hai phương pháp: Phương pháp điện di mao quản vừa xây dựng và phương pháp HPLC theo BP 2008. Các bước tiến hành như sau:
Bảng 3.14: Các bước tiến hành định lượng
Các
bước Phương pháp HPLC Phương pháp CZE
Chuẩn bị đệm
Hút chớnh xác 6,8 mL acid phosphoric, thêm nước tới 300 mL, chỉnh pH = 7,0 bằng dung dịch NaOH, thêm nước vừa đủ 1000 mL. Lắc siêu âm 10 phút. Lọc qua màng lọc 0,45àm
Cân chính xác 780 g Natri dihydrophosphat vào cốc có mỏ khô, pha trong nước và chuyển vào bình định mức 100 mL, thêm nước tới vạch rồi lắc siêu âm cho đồng nhất. Cân chính xác 890 g Natri dihydrophosphat vào cốc có mỏ khô, pha trong nước và chuyển vào bình định mức 100 mL, thêm nước tới vạch rồi lắc siêu âm cho đồng nhất. Đem đo pH của 70 mL dung dịch Natri dihydrophosphat, thêm dần dần dung dịch muối Natri dihydrophosphat cho đến khi đạt pH 6,8.
Dung dịch thử
- Cân lượng chế phẩm tương ứng với 50 mg hoạt chất. Thêm 3 mL methanol, thêm đệm vừa đủ 50 mL (dung dịch 1). Lắc siêu âm 10 phút.
- Hút chính xác 5,0 mL dung dịch 1, thêm đệm vừa đủ 20 mL. Lắc kỹ. Lọc qua màng lọc 0,2 àm.
- Cân lượng chế phẩm tương ứng với 50 mg hoạt chất. Thêm 3 mL methanol, thêm nước vừa đủ 100 mL.(dung dịch 2). Lắc siêu âm 10 phút.
- Hút chính xác 5,0 mL dung dịch 2, thêm 2 mL dung dịch chuẩn nội thêm đệm vừa đủ 10 mL. Lắc kỹ. Lọc qua màng lọc 0,2 àm. Dung dịch chuẩn - Cân chính xác khoảng 50 mg chất chuẩn. Làm tương tự như dung dịch thử.
- Cân chính xác khoảng 50 mg chất chuẩn. Làm tương tự như dung dịch thử.
Chương trình định lượng
- Cột Hichrom C18 chiều dài 150 mm đường kính 4,6 mm, kích thước hạt nhồi cột 5 µm, - Pha động: Dung dịch tetrabutyl amoni hydroxid 0,01 N, chỉnh pH 7 bằng acid phosphoric - acetonitril ( 70 : 30 ), - Tốc độ dòng: 1,2 mL/phỳt. - Thể tích tiêm: 20 µl, - Detector: UV 254 nm.
- Cột Agilent HPCE đường kính trong 50 µm, chiều dài hiệu dụng 40 cm,
- Tiêm mẫu bằng áp suất 50 mbar x 5 giây,
- Điện thế: 25 kV, - Detector: 283 nm,
- Nhiệt độ mao quản: 250C.
Bảng 3.15: So sánh hai phương pháp HPLC và CE Kết quả Phương pháp HPLC CZE Lần 1 96,92 95,50 Lần 2 95,32 95,64 Lần 3 95,74 96,20 Lần 4 95,82 96,10
Lần 5 96,77 94,83 Lần 6 95,13 96,58 HLTB (mg) 95,95 95,8 RSD (%) 0,77 0,65 Cỡ mẫu 6 6 S2 0,55 0,38 Test F Ftn=1,18, Flt = 5,05 Ftn < Flt Test t Sd = 0,43, tα = 3,17, ε = 1,36 = 0,15 < ε
Nhận xét: Độ chính xác và giá trị trung bình của hàm lượng cefixim trong chế phẩm theo 2 phương pháp điện di mao quản và HPLC quy định trong Dược điển khác nhau không có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 99%. Mặt khác, phương pháp điện di mao quản không phải sử dụng lượng dung môi nhiều và đắt tiền như kỹ thuật HPLC do đó kinh tế hơn phương pháp HPLC. Ước tính giá thành phân tích một mẫu theo phương pháp CE là 50 000 đồng/ mẫu so với 800 000 đồng/ mẫu theo phương pháp HPLC tức là chỉ bằng 1/16 so với sử dụng phương pháp HPLC, mặt khác lại ớt gõy ô nhiễm hơn. Do đó trong thực tế phương pháp điện di mao quản đã xây dựng có thể dùng để định lượng cefixim trong chế phẩm thay thế cho phương pháp HPLC.