Chương 3 KẾT QUẢ
3.1.3.3. Xác định quy trình rửa mao quản
Trong thời gian tiến hành điện di, khi bắt đầu và kết thúc của ngày cũng như giữa các lần chạy mẫu thử, mao quản đều được rửa để làm giảm sự hấp phụ mẫu phân tích lên bề mặt mao quản, giúp phục hồi và ổn định bề mặt mao quản. Qua quá trình khảo sát, chúng tôi đề xuất quá trình xử lý mao quản như sau nhằm thu được kết quả phân tích tối ưu nhất như sau:
Hàng ngày:
Bắt đầu một ngày: rửa bằng dung dịch NaOH 1M trong 5 phút, sau đó bằng dung dịch NaOH 0,1 M trong 5 phút, tiếp đến là nước cất siêu tinh khiết
min 2.5 5 7.5 10 mAU 0 5 10 15 20
DAD1 A, Sig=200,4 Ref=off (KHOIDUOC5\24HTGCEFIXIM483.D)
0 .0 89 5 .2 37 5 .8 85 6 .0 31 6 .2 98 7 .6 39 ce fix im 30 mM c)
trong 5 phút, cuối cùng là đệm chạy mẫu trong 5 phỳt. Cỏc dung dịch và nước cất để rửa đều được lọc qua màng lọc 0,2 àm.
Kết thúc cuối ngày: rửa bằng dung dịch SDS 10 mM trong 5 phút, tiếp đến là nước cất siêu tinh khiết trong 2 phút, tiếp theo là dung dịch NaOH 0,1M trong 5 phút, cuối cùng là nước cất siêu tinh khiết trong 10 phỳt. Cỏc dung dịch và nước cất để rửa đều được lọc qua màng lọc 0,2 àm.
Giữa các lần chạy mẫu (chương trình preconditioning) như sau: 0,5 phút SDS 10 mM + 0,5 phút nước tinh khiết + 1 phút NaOH 0,1M + 0,5 phút nước tinh khiết + 2 phút đệm.
Dùng SDS 10 mM có tác dụng rửa trôi rất tốt các chất có trong mẫu huyết tương phân tích. Kết quả được đánh giá thông qua độ lặp lại của thời gian dịch chuyển của pic CFX khi chạy liên tiếp với cùng 2 ống đệm như nhau. Kết quả lặp lại với 12 mẫu cho RSD(%) của thời gian dịch chuyển là 2,43%, RSD < 3% nên quy trình rửa mao quản như trên là tốt . Tuy nhiên khi thay 2 cặp ống đệm khác nhau thì thời gian dịch chuyển có thể khác nhau, nhưng đối với một cặp ống đệm thì cho độ lặp lại tốt.
Nếu thời gian dịch chuyển bị thay đổi nhiều (giảm đi) và không lặp lại do các chất có trong dịch phân tích mang điện dương bám vào thành cột, khi rửa lại bằng chương trình: 5 phút H3PO4 0,01M + 5 phút nước cất siờu tinh khiết + 5 phút NaOH 0,1M + 1 phút nước cất + 5 phút đệm, kết quả lặp lại tốt hơn.
Vậy chương trình rửa mao quản: 0,5 phút SDS 10 mM + 0,5 phút nước tinh khiết + 1 phút NaOH 0,1M + 0,5 phút nước tinh khiết + 2 phút đệm được lựa chọn cho việc rửa mao quản trước mỗi lần chạy mẫu.