Khả năng ức chế vi khuẩn gây bệnh là một trong các chỉ tiêu quan trọng trong đánh giá khả năng probiotic. Vai trò chính của probiotic là ngăn cản sự thâm nhập và phát triển vi sinh vật gây bệnh. Kết quả đánh giá khả năng ức chế một số chủng vi sinh vật gây bệnh của 4 chủng vi khuẩn được trình bày ở Bảng 3.5 và Hình 3.10.
Bảng 3.5: Khả năng ức chế một số vi sinh vật gây bệnh của 4 chủng vi khuẩn
Hoạt tính ức chế một số vi sinh vật gây bệnh được đánh giá là có vòng kháng khuẩn càng rộng thì khả năng ức chế vi sinh vật gây bệnh càng tốt. Kết
STT Kí hiệu chủng Đường kính vòng kháng khuẩn (mm) E.coli Salmonella enterica Staphylococcus aureus Bacillus cereus 1 VTCC-B-421 11 9 5 8 2 VTCC-B-431 10 12 6 2 3 VTCC-B-426 10 12 7 8 4 VTCC-B-1450 9 10 4 4
kiểm định.Trong đó 2 chủng VTCC-B-421 và VTCC-B-426 có hoạt tính ức chế cao hơn.
A B
Kí hiệu:1:VTCC-B-421;2:VTCC-B-431;3:VTCC-B-426;4:VTCC-B-1450
Hình 3.10: Khả năng ức chế Bacillus cereus(A) và Salmonella enterica(B)
của 4 chủng vi khuẩn
3.3.7. Khả năng sinh acid lactic của 4 chủng vi khuẩn
Sau khi tiến hành nuôi cấy các chủng nghiên cứu trên môi trường MRS ở nhiệt độ 37oC trong 48h, chúng tôi tiến hành xác định khả năng sinh acid lactic của các chủng. Kết quả được thể hiện trong Bảng 3.6.
Bảng 3.6: Khả năng sinh acid lactic của 4 chủng vi khuẩn
STT Kí hiệu chủng Hàm lượng acid lactic (mg/ml) 1 VTCC-B-421 21 2 VTCC-B-426 20 3 VTCC-B-431 22 4 VTCC-B-1450 18
Kết quả thu được cho thấy hàm lượng acid lactic do các chủng sinh ra tương đối đồng đều từ 18-22mg/ml. So sánh với kết quả nghiên cứu của tác giả Đào Thị Lương và cộng sự (2010)[5], chúng tôi thấy rằng 4 chủng nghiên cứu đều có khả năng sinh acid lactic cao, đáp ứng tiêu chí lựa chọn chủng có hoạt tính probiotic.
Với mục đích sử dụng 4 chủng vi khuẩn lactic: VTCC-B-421; VTCC- B-431; VTCC-B-426; VTCC-B-1450 có khả năng sinh GABA làm probiotic, chúng tôi đã tiến hành khảo sát một số đặc điểm quan trọng cần cho prbiotic. Các nghiên cứu lựa chọn chủng vi khuẩn lactic làm probiotic thường quan tâm đến các chỉ tiêu quan trọng như: chủng an toàn, khả năng sống và phát triển trong đường tiêu hóa của vật chủ: dịch dạ dày, ruột non, chịu được muối mật, pH thấp, khả năng bám dính và sinh bacteriocin. Kết quả nghiên cứu của chủng tôi cho thấy cả 4 chủng lựa chọn sinh GABA đều là các chủng an toàn (GRAS) có khả năng tồn tại trong đường tiêu hóa của vật chủ cụ thể đảm bảo tỷ lệ sống cao > 107 CFU/ml trong dịch dạ dày và dịch ruột (Bảng 3.2), chịu được pH 2-3 (Hình 3.7), chịu được nồng độ muối mật 0,3% (Hình 3.8). Đây là yêu cầu tiên quyết đối với các chủng dùng cho sản xuất probiotic để đảm bảo an toàn và tồn tại, phát triển trong hệ tiêu hóa của vật chủ. Các nghiên cứu trước đây [8],[12], đều tiến hành khảo sát khả năng chịu muối mật của chủng Lactobacillus nghiên cứu trong giới hạn 0,05-1%. Các chủng được nghiên cứu, có khả năng tồn tại, phát triển trong hệ tiêu hóa vật chủ, không chỉ sinh acid lactic và acid hữu cơ khác (acid acetic, propionic) có vai trò giảm pH trong hệ tiêu hóa mà còn sinh các bacteriocin có khả năng ức chế sự phát triển của các vi sinh vật gây bệnh như Salmolella, E.coli, Clostridium. Để đánh giá khả năng tồn tại trong đường tiêu hóa, khả năng tồn tại trong môi trường với các loại kháng sinh khác nhau của 4 chủng cũng được chúng tôi khảo sát (Bảng 3.4). Với chỉ tiêu này, các nghiên cứu khác cũng khác nhau về số lượng và loại kháng sinh sử dụng: nghiên cứu của P.B.Chauhan [12] sử
Penicillin (15µg) và Vancomycin (30 µg). Trong khi đó nghiên cứu của P.K. Jena [27] sử dụng các loại kháng sinh: Chloramphenicol, Quinupristin/Dalfopristin, Clindamycin, Erythromycin, Vancomycin, Ampicillin, Streptomycin, Kanamycin Gentamicin. Trong nghiên cứu này chúng tôi sử dụng 6 loại kháng sinh (Bảng 3.4) tương đối phổ biến sử dụng trong điều trị rối loạn tiêu hóa trên người. Khả năng bám dính của chủng vi khuẩn lactic có vai trò quan trọng đối với vật chủ ở chỗ: các tế bào vi khuẩn không chỉ đơn thuần là cạnh tranh vị trí bám trên nhu mô ruột, ngăn cản sự tiếp xúc với vi khuẩn và tác nhân gây bệnh (như độc tố) với nhu mô ruột, mà còn có vai trò kích thích hệ miễn dịch của vật chủ. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cho thấy, 4 chủng vi khuẩn Lactobacillus sinh GABA: VTCC-B- 421; VTCC-B-431; VTCC-B-426; VTCC-B-1450 cơ bản đáp ứng được các yêu cầu chủ yếu cho sản xuất probiotic về tính an toàn, khả năng tồn tại trong đường tiêu hóa vật chủ, khả năng sinh bacterioncin. Việc nghiên cứu sử dụng các chủng này cần có các nghiên cứu thêm liên quan đến khả năng thích hợp cho phát triển công nghệ lên men, thu hồi và phát triển sản phẩm thương mại.