3. Ý nghĩa của đề tài
2.4.1. Nghiên cứu khả năng sản xuất tinh dịch của trâu Chiêm Hóa và
hưởng của cá thể, mùa vụ đến một số chỉ tiêu sản xuất của tinh dịch
- Nghiên cứu khả năng sản xuất, ảnh hưởng của cá thể đến một số chỉ tiêu sản xuất (lượng tinh, phẩm chất tinh) của 5 trâu đực giống Chiêm Hóa được nuôi nhốt và có khẩu phần ăn như nhau.
- Nghiên cứu ảnh hưởng của mùa vụ đến một số chỉ tiêu sản xuất (lượng tinh, phẩm chất tinh) của trâu Chiêm Hóa.
Mỗi vụ lấy kiểm tra 25 mẫu/trâu. Lấy trong 2 vụ (xuân - hạ, thu - đông) - Mỗi cá thể trâu đực được nuôi trong một ô chuồng riêng với diện tích là 45m2, trong đó gồm 20m2 chuồng có mái che và 25m2 sân chơi không mái, có máng ăn và máng uống riêng cho từng con. Quản lý cá thể và phòng bệnh cho đàn trâu được thực hiện nghiêm ngặt, kiểm tra thú y định kỳ 2 lần/năm. Trâu đực giống trong nghiên cứu được cho ăn cùng chế độ dinh dưỡng tính sẵn cho từng cá thể theo tiêu chuẩn cơ sở dựa trên tiêu chuẩn của Kearl (1982). Các loại thức ăn thô được ăn tự do gồm có cỏ Alfalfa, cỏ pangola, cỏ ghinê và thức ăn tinh có tỷ lệ protein không nhỏ hơn 16%, nước uống đầy đủ, ngoài ra còn bổ sung khoáng bằng đá liếm.
2.4.1.1. Phương pháp khai thác tinh dịch trâu Chiêm Hóa
Thời gian khai thác tinh: từ 7 giờ đến 8 giờ sáng.
Tần suất khai thác tinh dịch: 3-4 ngày/lần (2 lần/1 tuần).
- Chuẩn bị âm đạo giả: Các bộ phận của âm đạo giả được khử trùng rồi
lắp ráp và bảo quản trong tủ ấm 420C trước khi lấy tinh.
- Chuẩn bị trâu đực: Trâu đực đến ngày khai thác tinh được tắm sạch sẽ
và thụt rửa bao dương vật trước khi khai thác tinh 30 phút bằng nước muối sinh lý 0,9%.
- Chuẩn bị trâu làm giá: Chọn trâu làm giá có tầm vóc thích hợp, vệ sinh cơ thể trâu sạch sẽ và cho vào giá.
- Khai thác tinh: Kích thích cho trâu đực hưng phấn rồi cho trâu đực
nhảy trâu giá và lấy tinh bằng âm đạo giả.
Mẫu tinh dịch khai thác được đưa ngay vào phòng thí nghiệm và đặt trong bể nước ấm 350C để kiểm tra các chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch.
2.4.1.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của cá thể mùa vụ đến một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng của tinh trâu
Các chỉ tiêu nghiên cứu gồm:
+ Lượng tinh (V - ml). + Hoạt lực tinh trùng (A - %). + Nồng độ tinh trùng (C - tỷ/ml). + pH. + Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (%). + Tỷ lệ tinh trùng sống (%).
* Lượng tinh (thể tích tinh dịch trong một lần xuất tinh - V, ml): là lượng
tinh dịch khai thác được trong 1 lần trâu đực xuất tinh, được xác định bằng ống nhựa có chia vạch khắc ml, đặt thăng bằng ngang tầm mắt. Đọc kết quả theo mặt cong của mặt thoáng tinh dịch.
* Độ pH của tinh dịch:được xác định bằng giấy đo pH.
Dùng đũa thủy tinh lấy 1 giọt tinh dịch nhỏ lên giấy pH và sau 3 giây thì so sánh màu của giấy với bảng màu chuẩn.
* Hoạt lực của tinh trùng (A, %):
Hoạt lực của tinh trùng là tổng số tinh trùng tiến thẳng so với tổng số tinh trùng có trong tinh dịch trên vi trường quan sát.
Dùng micropipét hút 0,01 ml tinh dịch + 0,09 ml dung dịch A (môi trường pha loãng tinh dịch không có glycerol) rồi nhỏ lên phiến kính chuyên dụng và
được giữ ấm ở nhiệt độ 380C. Dùng lamen khô, sạch đậy lên giọt tinh sao cho giọt tinh dịch quét đều bốn cạnh của lamen. Đưa phiến kính lên soi dưới kính hiển vi với độ phóng đại 200 lần. Ước lượng tỷ lệ phần trăm số tinh trùng tiến thẳng so với tổng số tinh trùng có trong vi trường mà ta quan sát được. Việc đánh giá cho điểm được tiến hành theo thang điểm 10 của Milovanov.
* Nồng độ tinh trùng (C,tỷ/ml): Trong thí nghiệm này, chúng tôi sử
dụng phương pháp xác định nồng độ tinh trùng bằng buồng đếm Newbower. Lắp lamelle kính đã được làm sạch, khô lên mặt buồng đếm. Dùng ống pha loãng hồng cầu để hút tinh dịch đến vạch 0,5 sau đó hút tiếp dung dịch NaCl 3% đến vạch 11. Chú ý: không được để có bọt khí trong ống pha loãng hồng cầu trong quá trình hút. Nếu có bọt khí phải súc rửa sạch ống pha loãng và làm lại. Bịt hai đầu ống pha loãng bằng ngón tay cái và ngón tay giữa, lắc nhẹ từ 5-6 lần cho tinh dịch trộn đều với dung dịch NaCl. Mức độ pha loãng 200 lần. Bỏ đi vài giọt dung dịch ở phần ống dưới, nhỏ hỗn hợp này vào trong buồng đếm, đưa lên kính hiển vi có độ phóng đại 200-400 lần để đếm.
* Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K, %): được xác định bằng phương pháp của
Chemineau (1991), cụ thể:
+ Phết tiêu bản: Lấy một phiến kính A khô sạch, không có vết xước trên mặt. Ghi số hiệu đực giống, ngày kiểm tra ở một đầu phiến kính, lấy một giọt tinh dịch kéo ngang trên phiến kính. Đặt chiều rộng lam kính B trùng khít với cạnh ngang tinh dịch và nghiêng phiến kính A một góc 450, kéo xuôi nhẹ một lần sao cho tinh dịch dàn đều trên phiến kính A.
+ Cố định: Để phiến kính có tinh dịch dàn đều tự khô trong không khí hoặc hơ nhẹ trên ngọn lửa đèn cồn để tinh trùng dính chặt trên lam kính, cố định 2-3 phút sau đó cho vòi nước chảy nhẹ vào lam kính (tránh tinh trùng bị trôi mất), vẩy khô.
+ Nhuộm: Dùng xanh Methylen 5% nhỏ lên phiến kính để trong 5 phút, sau đó từng giọt nước trôi thật nhẹ nhàng trên lamen bằng nước sạch, vẩy khô.
+ Quan sát trên kính hiển vi và đếm: Đặt phiến kính lên kính hiển vi với độ phóng đại 400 lần, đếm số tinh trùng kỳ hình và tổng số tinh trùng có trong vi trường.
+ Đếm hết tinh trùng trong vi trường này xong mới chuyển sang vi trường khác cho đủ tổng số tinh trùng trong khoảng 300-500. Nếu vi trường có tinh trùng quá dầy thì chọn vi trường khác để đếm.
Công thức tính như sau:
K (%) = Số lượng tinh trùng kỳ hình x 100 500
* Tỷ lệ tinh trùng sống (Sg %): Xác định theo phương pháp của Blom
(1950) , bằng cách nhỏ 1 giọt tinh dịch lên lam kính lõm và 2 giọt Eos5%, đảo nhẹ, sau đó nhỏ 4 giọt Nigrosin 10%, đảo nhẹ, để ấm 370C trong 30 giây. Lấy 1 giọt tinh dịch đã nhuộm phết kính dàn mỏng đều đưa lên kính hiển vi với độ phóng đại 400 lần. Đếm tổng số 500 tinh trùng gồm cả tinh trùng sống và tinh trùng chết (tinh trùng chết là những tinh trùng bắt màu đỏ Eosin). Tính tỷ lệ tinh trùng sống bằng công thức sau:
Tỷ lệ tinh trùng sống (%) = Số lượng tinh trùng sống x 100 500
2.4.2. Nghiên cứu khả năng sản xuất tinh đông lạnh dạng cọng rạ và chất lượng của tinh cọng rạ sau giải đông lượng của tinh cọng rạ sau giải đông
2.4.2.1. Phương pháp đánh giá khả năng sản xuất tinh đông lạnh cọng rạ
Các chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch đạt tiêu chuẩn, số lượng tinh sản xuất và số lượng tinh cọng rạ sản xuất đạt tiêu chuẩn được tính toán theo từng cá thể, bằng phép tính số học thường quy sau khi đưa mẫu tinh dịch trâu đạt tiêu chuẩn vào sản xuất tinh đông lạnh.
2.4.2.2. Phương pháp đánh giá hoạt lực tinh trùng sau giải đông
Hoạt lực tinh trùng sau giải đông (%) được xác định sau khi bảo quản tinh đông lạnh 24 giờ, kiểm tra ngẫu nhiên 1 cọng rạ của từng lô tinh cọng rạ của từng lần khai thác tinh đạt tiêu chuẩn của từng trâu đực, giải đông ở nhiệt độ 37°C trong 30 giây, kiểm tra hoạt lực tinh trùng trên kính hiển vi, nếu hoạt lực A 40% thì đạt tiêu chuẩn.
2.4.2.3. Phương pháp đánh giá hoạt lực tinh trùng sau thời gian bảo quản 6 tháng và 12 tháng
Tinh trâu đông lạnh dạng cọng rạ được bảo quản trong ni tơ lỏng - 1960C, được đánh số cá thể, ngày sản xuất và sau thời gian bảo quản 6 tháng- 12 tháng được lấy ngẫu nhiên các cọng tinh của mỗi cá thể trâu và tiến hành giải đông tinh ở nhiệt độ 37°C trong 30 giây, kiểm tra hoạt lực tinh trùng trên kính hiển vi và đánh giá hoạt lực A (%) theo phương pháp đánh giá mục.
Xác định thời điểm phối giống thích hợp từ thông tin các cá thể trâu, quan sát bằng mắt thường, xác định thời điểm phối giống thích hợp là lúc lúc niêm dịch tiết ra nhiều có màu đục và đặc, kéo dài khó đứt, âm hộ ướt, niêm mạc âm đạo chuyển từ mầu hồng tươi sang mầu tím sẫm. Thời gian phối giống thích hợp là khoảng thời gian 10-12h kể từ khi trâu cái bắt đầu chịu đực.
Phương pháp phối giống kép: 1 liều vào thời điểm phối giống thích hợp 10- 12h kể từ khi trâu cái bắt đầu chịu đực; phối lặp lại sau 6 giờ kể từ khi phối tinh lần 1. Phương pháp pha loãng, phân liều, đóng gói, đông lạnh tinh dịch, sau khi đánh giá các chỉ tiêu (V.A.C) của tinh dịch đảm bảo tiêu chuẩn tiến hành pha loãng tinh dịch đảm bảo nồng độ tinh trùng từ 80-100 triệu tinh trùng/1 ml, đóng liều 0,25ml/cọng.
Đông lạnh nhanh (PP1): Đặt cọng rạ trên khay nằm ngang cách bề mặt nitơ lỏng 4cm, sau đó đưa ngay các cọng rạ ngập trong nitơ lỏng để bảo quản.
2.4.2.4. Phương pháp xác định tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu bằng tinh đông lạnh cọng rạ của từng trâu Chiêm Hóa
Sử dụng phương pháp khám thai qua trực tràng sau khi phối 90 ngày để xác định trâu cái có chửa. Tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu tính theo công thức:
Tỷ lệ thụ thai ở lần phối đầu (%) = Số trâu cái có chửa x 100 Tổng số trâu cái phối lần một