tiến hành cùng lúc với phân lập nấm trên các môi trường thạch có chất chỉ thị. PDA là môi trường được sử dụng để phân lập các mẫu nấm tươi này. Những năm gần đây, guaiacol và syringaldazine bổ sung vào môi trường như các chất chỉ thị để quan sát sự xuất hiện màu xung quanh sự phát triển của vi sinh vật. Trong thí nghiệm này, guaiacol 0,01% được bổ sung vào môi trường PDA rắn, enzyme ngoại bào được tiết ra và phản ứng với guaiacol tạo thành màu nâu đỏ trên đĩa thạch.
Mẫu nấm đảm được cắt nhỏ với kích thước khoảng 0,5 x 0,5 cm sau đó đặt lên đĩa thạch có chứa sẵn môi trường PDA bổ sung guaicol để làm chất chỉ thị và các đĩa thạch này được nuôi ở 30 0C trong thời gian 2 – 4 ngày. Chọn các chủng nấm tạo thành màu nâu đỏ trên đĩa thạch tiến hành tách riêng và làm sạch.
2.2.2. Sàng lọc các chủng nấm sinh enzyme ngoại bào
Từ các chủng nấm đã được làm sạch, ta sẽ tiến hành sàng lọc khả năng sinh các enzyme ngoại bào khác nhau. Môi trường sử dụng trong thí nghiệm (TSH1): dịch chiết khoai tây: 200 g/l, glucose: 10 g/l, cám: 0,1%, bột đậu tương 0,5% và Cu2+
: 0,1 mM trong bình tam giác 250 ml ở 300C và 200 rpm. Hoạt tính laccase của các chủng nấm được xác định sau từng ngày nuôi cấy [6].
2.2.3. Phương pháp thu dịch laccase trên môi trường lên men lỏng để xác định hoạt tính tính
Laccase trong các bình nuôi cấy được thu trong tủ cấy vô trùng Laminar (Pháp), thao tác thực hiện bên ngọn lửa đèn cồn. Với các thiết bị sử dụng để thu dịch là pipet 1000µl, các đầu tuýp 1ml và Eppendoft (Đức) 1,5-2ml. Dùng pipet đã gắn đầu tuýp hút dịch enzyme trong các bình môi trường chứa chủng nấm vào các eppendoft, sau đó
Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền
đem ly tâm ở 12000v/p tại 4ºC trong 10 phút, dịch nổi thu được sử dụng để xác định hoạt tính laccase.