Bằng phương phỏp khối thạch cỏc chủng XK phõn lập được thử nghiệm hoạt tớnh khỏng sinh với vi sinh vật kiểm đinh gồm vi khuẩn Gram dương:
B.subtilis, S.aureus; vi khuẩn G (-): E.coli và vi nấm Fusarium oxysporum.
Đồng thời cỏc chủng XK phõn lập cũng được thử hoạt tớnh khỏng sinh với vi khuẩn S.aureus được phõn lập tại bệnh viện đa khoa Tỉnh Bắc Ninh.
Kết quả thử hoạt tớnh khỏng sinh cho thấy rằng cú 22 chủng xạ khuẩn trong tổng số 47 chủng phõn lập tại Thỏi Bỡnh cú khả năng sinh khỏng sinh ức chế sự sinh trưởng phỏt triển của cỏc vi sinh vật kiểm định (bảng 3.4).
Bảng 3.4. Phõn loại xạ khuẩn phõn lập ở Thỏi Bỡnh theo nhúm màu và hoạt tớnh khỏng sinh. Nhúm xạ khuẩn Cỏc chủng thuộc cỏc nhúm Cỏc chủng cú hoạt tớnh khỏng sinh Tỉ lệ chủng cú hoạt tớnh KS so với tổng số (%) Số lượng % Số lượng % Trắng 22 46,8 9 40,9 19,14 Xỏm 15 31,91 8 36,36 17,02 Nõu 4 8,51 3 13,63 6,38 Hồng 4 8,51 1 4,54 2,13 Xanh 2 4,25 1 4,54 2,13 Tổng số 47 100 22 100 46,8
Kết quả thu được qua bảng 3.4 cho thấy cỏc chủng xạ khuẩn phõn lập tại đất rừng ngập mặn Tỉnh Thỏi Bỡnh cú số lượng chủng thuộc nhúm màu trắng chiếm tỷ lệ cao nhất 46,8 %, sau đú đến nhúm màu xỏm (31,91 % ). Do vậy, cỏc chủng cú hoạt tớnh khỏng sinh trong nhúm mỏu trắng cũng chiếm tỉ lệ lớn nhất (40,9 % ), sau đú đến nhúm màu xỏm (51,06 %).
Từ 22 chủng xạ khuẩn phõn lập tại Thỏi Bỡnh chỳng tụi chọn ra 10 chủng cú hoạt tớnh khỏng sinh mạnh hơn cả (trờn 10 mm) để tiếp tục nghiờn cứu. Tuy nhiờn, trong 10 chủng này chỉ cú 4 chủng cú hoạt tớnh diệt vi khuẩn
S. aureus và 2 chủng là TB10.2 và TB32.4 cú hoạt tớnh mạnh lần lượt là 19 mm và 15 mm, kết quả thể hiện qua hỡnh 3.3 và bảng 3.5.
Hỡnh 3.3. hoạt tớnh khỏng sinh của cỏc chủng xạ khuẩn phõn lập tại Tỉnh Thỏi Bỡnh diệt vi khuẩn S. aureus
1: TB6.3, 2: TB12.6, 3: TB10.2, 4: TB8.5, 5: TB7.2, 6: TB9.4
Bảng 3.5. Hoạt tớnh khỏng sinh của cỏc chủng xạ khuẩn phõn lập tại Tỉnh Thỏi Bỡnh khỏng vi khuẩn Staphylococcus aureus
Chủng Xạ khuẩn TB 10.2 TB 32.4 TB 30.8 TB 9.3 HTKS (D-d), mm 19 15 10 12
Với mục đớch tuyển chọn cỏc chủng xạ khuẩn cú hoạt tớnh diệt vi khuẩn
S.aureus phục vụ y học cỏc chủng này được nuụi trờn mụi trường dịch thể Gauze I, lắc trờn mỏy lắc trũn với tốc độ 200 vũng/phỳt, nhiệt độ nuụi cấy 28- 30 oC trong 120 giờ. Bằng phương phỏp khuyếch tỏn trong thạch (sử dụng phương phỏp giếng thạch) chỳng tụi đó tiến hành xỏc định hoạt tớnh khỏng sinh của dịch lờn men cỏc chủng xạ khuẩn đối với cỏc vi sinh vật kiểm định. Kết quả được trỡnh bày ở bảng 3.6 và hỡnh 3.4.
Bảng 3.6. Hoạt tớnh khỏng sinh của cỏc chủng xạ khuẩn phõn lập tại Thỏi Bỡnh trong mụi trường dịch thể khỏng vi khuẩn Staphylococcus aureus
Chủng Xạ khuẩn TB 10.2 TB 32.4 TB 30.8 TB 9.3 A 5 1 2 3 4 6
HTKS (D-d), mm
22 18 12 13
Chỳ thớch: HTKS: Hoạt tớnh khỏng sinh, D: Đường kớnh vũng vụ khuẩn, d: Đường kớnh giếng thạch
Hỡnh 3.4. Hoạt tớnh khỏng sinh của cỏc chủng xạ khuẩn tuyển chọn đất ngập mặn tỉnh Thỏi Bỡnh
1: TB9.3, 2: TB10.2, 3: TB32.4, 4: 30.8
Từ kết quả trờn cho thấy chủng xạ khuẩn TB10.2 cú hoạt tớnh mạnh nhất và ổn định với vi khuẩn S. aureus. Vỡ vậy, cú thể sử dụng chủng TB10.2 để tiến hành cỏc nghiờn cứu tiếp theo.
Đồng thời sàng lọc được 36 chủng xạ khuẩn trong tổng số 79 chủng xạ khuẩn phõn lập tại Nam Định cú hoạt tớnh khỏng sinh ức chế sự sinh trưởng phỏt triển của cỏc vi sinh vật kiểm định (bảng 3.7).
Bảng 3.7. Phõn loại xạ khuẩn phõn lập tại rừng ngập mặn Tỉnh Nam Định theo nhúm màu và hoạt tớnh khỏng sinh.
Nhúm xạ khuẩn Cỏc chủng thuộc cỏc nhúm Cỏc chủng cú hoạt tớnh khỏng sinh Tỉ lệ chủng cú hoạt tớnh KS so với tổng số (%) Số lượng % Số lượng % Trắng 47 59,49 24 51.06 30,38 Xanh 3 3,8 1 2,78 1,27 Hồng 12 15,13 6 16,67 7,6 1 4 3 2
Xỏm 8 10,12 4 11,11 5,06
Nõu 6 7,6 - - -
Vàng 3 3,8 1 2,78 1,27
Tổng số 79 100% 36 100 45,58
Kết quả thu được qua bảng 3.6 cho thấy trong số cỏc chủng cú hoạt tớnh khỏng sinh, cỏc chủng màu trắng vẫn chiếm tỉ lệ lớn nhất (59,49 %), sau đú đến nhúm màu hồng (15,13 %). Tuy nhiờn, cỏc chủng xạ khuẩn phõn lập tại Nam Định cú sự đa dạng hơn về cỏc nhúm xạ khuẩn (6 nhúm) nhưng tỷ lệ cỏc nhúm cú khả năng sinh khỏng sinh là 5/6 và nhúm xạ khuẩn sinh khỏng sinh chiếm tỷ lệ cao nhất là 51,06%.
Với 10 chủng phõn lập tại rừng ngập mặn Nam Định cú hoạt tớnh khỏng sinh mạnh nhất được sử dụng để thử nghiệm hoạt tớnh khỏng sinh với vi khuẩn S. aureus chỉ 6 chủng cú hoạt tớnh xuất hiện vũng vụ khuẩn. Tuy nhiờn cỏc vũng hoạt tớnh cú độ rộng thấp từ 7 – 15mm và chủng cú hoạt tớnh mạnh nhất là NĐ 30.6. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Hỡnh 3.5. hoạt tớnh khỏng sinh của cỏc chủng xạ khuẩn phõn lập tại Nam Định diệt vi khuẩn S. aureus
1: NĐ2.1, 2: NĐ3.4, 3: NĐ1.7, 4: NĐ9.110, 5: NĐ30.6, 6: NĐ31.10
Bảng 3.8. Hoạt tớnh khỏng sinh của cỏc chủng xạ khuẩn tuyển chọn khỏng vi khuẩn Staphylococcus aureus
Chủng Xạ
khuẩn NĐ2.1 NĐ8.9 NĐ9.10 NĐ30.6 NĐ31.10 NĐ31.16
HTKS (D-d), mm
7 9 11 15 12 8
Chỳ thớch: HTKS: Hoạt tớnh khỏng sinh, D: Đường kớnh vũng vụ khuẩn, d: Đường kớnh giếng thạch 5 1 2 3 4 6
Tương tự như với cỏc chủng xạ khuẩn phõn lập tại Thỏi Bỡnh sử dụng phương phỏp khuyếch tỏn trong thạch (sử dụng phương phỏp giếng thạch) chỳng tụi đó tiến hành xỏc định hoạt tớnh khỏng sinh của dịch lờn men cỏc chủng xạ khuẩn đối với cỏc vi sinh vật kiểm định. Kết quả được trỡnh bày ở bảng 3.9 và hỡnh 3.6.
Bảng 3.9. Hoạt tớnh khỏng sinh của cỏc chủng xạ khuẩn tuyển chọn trong mụi trường dịch thể khỏng vi khuẩn Staphylococcus aureus
Chủng Xạ khuẩn NĐ2.1 NĐ8.9 NĐ9.10 NĐ30.6 NĐ31.1 0 NĐ31.1 6 HTKS (D-d mm) 9 11 15 19 16 10
Chỳ thớch: HTKS: Hoạt tớnh khỏng sinh, D: Đường kớnh vũng vụ khuẩn, d: Đường kớnh giếng thạch
Hỡnh 3.6. Hoạt tớnh khỏng sinh của dịch nuụi cấy cỏc chủng xạ khuẩn tuyển chọn tại đất rừng ngập mặn tỉnh Nam Định
1: NĐ2.1, 2: NĐ8.9, 3: NĐ31.16, 4: NĐ9.10
Kết quả thử hoạt tớnh dịch lắc của cỏc chủng xạ khuẩn nờu trờn thu được sau khi thử hoạt tớnh với vi khuẩn kiểm định S. aureus cú sự thay đổi về kớch thước vũng vụ khuẩn. Tuy nhiờn, sự thay đổi hoạt tớnh của cỏc chủng trờn là do cỏc chủng được nuụi trong điều kiện lắc cú sự chuyển động trong mụi trường dịch thể và lượng trao đổi khớ nhiều hơn dẫn đến sự phỏt triển nhanh của xạ cỏc chủng xạ khuẩn vỡ vậy lượng khỏng sinh sinh ra nhiều hơn. Từ kết quả trờn, để tiếp tục những nghiờn cứu tiếp theo chỳng tụi đó lựa chọn
1
4 3
chủng TB10.2 cú hoạt phổ và hoạt tớnh khỏng sinh mạnh và ổn định nhất để tiếp tục nghiờn cứu phõn loại.