Phần 3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
3.3. Phương pháp nghiên cứu
3.3.2. Phương pháp xác định số loại và số lượng vi khuẩn
3.3.2.1. Phương pháp xác định số loại vi khuẩn
Mỗi loại vi khuẩn khi mọc trên các môi trường thì khuẩn lạc có đặc tính mọc đặc trưng. Dựa vào những đặc điểm đặc trưng đó để xác định loại vi khuẩn có trong mẫu dịch tử cung.
- Môi trường thạch thường:
+ Staphylococcus: khuẩn lạc dạng S, tròn bóng, rìa gọn, mặt lồi, có màu vàng. + Streptococcus: khuẩn lạc dạng S, nhỏ, màu hơi xám, bóng.
+ Salmonella: khuẩn lạc dạng S, có thể dạng R, tròn, trong hoặc hơi xám, nhẵn bóng, hơi lồi lên ở giữa.
+E. Coli: khuẩn lạc dạng S, có thể dạng R, tròn, ướt, màu tro hay trắng
nhạt, hơi lồi.
- Môi trường thạch MacConkey:
+ E. Coli: hình thành những khuẩn lạc dạng S, màu hồng cánh sen.
+ Salmonella: khuẩn lạc tròn, trong không màu, nhẵn bóng, hơi lồi ở giữa. - Môi trường thạch Birrilliant Green Agar:
+ E. Coli: khuẩn lạc dạng S, màu vàng chanh. + Salmonella: khuẩn lạc dạng S, màu hồng nhạt.
- Môi trường Chapman:
+ Staphylococcus: khuẩn lạc to, rìa gọn, nếu là tụ cầu gây bệnh làm môi
trường biến màu vàng, nếu là tụ cầu không gây bệnh: môi trường màu đỏ. - Môi trường Edwards Medium:
+ Streptococcus: vi khuẩn mọc tốt, khuẩn lạc nhỏ, mịn, ướt, mặt hơi lồi, trong sáng.
Trên cơ sở đó sau khi nuôi cấy mẫu trên môi trường thạch thường trong tủ
ấm 37oC/18- 24 giờ, quan sát hình thái và kích thước khuẩn lạc ta có thể phân
loại và xác định được số lượng của từng loại. Sau đó tiến hành phân lập, giám định các khuẩn lạc đó bằng cách chọn các khuẩn lạc điển hình cho từng loại vi khuẩn cấy sang các môi trường chuyên dụng.
3.3.2.2. Phương pháp xác định số lượng vi khuẩn
trên môi trường thạch thường, tuỳ theo số vi khuẩn có trong bệnh phẩm. Mẫu xét nghiệm cần phải pha loãng đến mức độ cần thiết. Sau nhiều lần cấy mẫu với các độ pha loãng khác nhau, chúng tôi đã xác định đựơc độ pha loãng thích hợp với các bệnh phẩm như sau:
+ Dịch tử cung lợn sau đẻ là: 10-4.
+ Dịch tử cung lợn bị viêm tử cung là: 10-7.
- Sau khi pha loãng, chúng tôi tiến hành cấy vi khuẩn vào đĩa thạch. Cấy dịch pha loãng mẫu trong môi trường thạch cứng rồi đếm số lượng khuẩn lạc (CFU). Số lượng CFU tương đương với số lượng vi khuẩn. Để có kết quả chính xác, cần thống nhất nhiệt độ và thời gian nuôi cấy. Số vi khuẩn có trong 1 ml dịch mẫu được tính theo công thức:
X= 10.A/N
Trong đó: X: số khuẩn lạc trong 1ml dịch.
A: số khuẩn lạc trung bình trên một đĩa petri.
N: độ pha loãng.