Phần 3 NÔI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3. Phương pháp nghiên cứu
3.3.2. Thí nghiệm cảm nhiễm trong điều kiện in vivo để xác định tác nhân gây
gây bệnh là vi khuẩn
Vi khuẩn dùng cho cảm nhiễm: Từ kết quả nuôi cây phân lập vi khuẩn từ mẫu cá bệnh ta chọn ra vi khuẩn Vibrio alginolyticus có tần suất bắt gặp cao để dùng cảm nhiễm ngược vào cá khỏe.
Cá trong thí nghiệm cảm nhiễm: Cá Chim vây vàng (có chiều dài 8- 10cm) được chuyển tử trại nuôi cá biển vịnh Vân Phong – Khánh Hòa. Các con cá này hoàn toàn khỏe mạnh, không bộc lộ các dấu hiệu bệnh lý ở ngoài và trong
cơ thể cá. Năm mẫu cá đã được giải phẫu để kiểm tra đầu vào trước khi tiến hành thí nghiệm và tìm vị trí an toàn nhất để tiêm huyền dịch vi khuẩn vào ổ bụng của cá. Cá được đưa về cơ sở thực nghiệm 1 tuần trước khi thí nghiệm bắt đầu.
Bố trí thí nghiệm cảm nhiễm
Cá thí nghiệm được bố trí vào 7 bể với mật độ 5 con/ bể, trong đó 6 bể là thí nghiệm và 1 bể là đối chứng. Thí nghiệm được thực hiện trong các thùng nhựa 120 lít, trong nhiệt độ 290C, pH 7 - 8, độ muối 30%0, lặp lại đồng thời 3 lần, sục khí liên tục, thay nước đồng loạt 30% - 50% khi thấy nước đục.Vi khuẩn sau khi lắc đều được tiêm vào cá để gây nhiễm cho cá khỏe ở hai nồng độ 10^4 cfu/ml, 10^6 cfu/ml (xác định mật độ bằng phương pháp MacFaland), bằng phương pháp tiêm vi khuẩn vào xoang bụng cá với liều 0,1 ml/con; cá ở nghiệm thức đối chứng được tiêm nước muối sinh lý 0,85% vô trùng 0,1 ml/con.
Sau khi tiêm, cá được chăm sóc và theo dõi trong vòng 14 ngày. Sức khỏe của cá, các dấu hiệu bệnh lý, tỷ lệ cá chết.
Cách bố trí thí nghiệm:
Hình 3.4.Sơ đồ bố trí thí nghiệm cảm nhiễm
Trong đó:
Nghiệm thức 1: cá tiêm dịch vi khuẩn nồng độ 106 Nghiệm thức 2: cá tiêm dịch vi khuẩn nồng độ 104 Đối chứng: cá tiêm nước muối sinh lý 0.85% vô trùng