Phần 3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
3.5. Phương pháp nghiên cứu
3.5.4. Phương pháp thực hiện phản ứng ngưng kết hồng cầu (HA)
3.5.4.1 Nguyên liệu
- Hồng cầu chuột lang 0,5%;
- Kháng nguyên chuẩn Porcine Parvovirus (PPV); - Nước sinh lý 0,9%.
3.5.4.2. Tiến hành phản ứng
- Phản ứng được tiến hành trên đĩa nhựa 96 giếng đáy chữ V
- Dùng micropipette nhỏ đều vào tất cả các giếng, mỗi giếng 50 µl nước muối sinh lý 0,9%.
- Cho tiếp vào giếng đầu tiên của mỗi hàng 50 µl PPV, trộn đều sau đó hút 50 µl từ giếng thứ nhất sang giếng thứ hai, trộn đều và hút 50 µl từ giếng thứ 2 sang giếng thứ 3, cứ làm như vậy cho đến giếng cuối cùng. Đến giếng cuối cùng thì hút bỏ đi 50 µl.
- Như vậy trong mỗi giếng đều chứa một lượng 50 µl nhưng có độ pha loãng gấp đôi ở giếng tiếp theo. Ban đầu PPV có độ pha loãng là 1:2. Sau khi đã xử lý độ pha loãng của PPV ở các giếng là: 1/4, 1/8, ..., 1/4096.
- Dùng micropipette nhỏ đều vào mỗi giếng 50 µl dung dịch hồng cầu 0,5%, lắc nhẹ cho hồng cầu phân bố đều trong các giếng. Để ở nhiệt độ phòng trong vòng 0,5 giờ đọc kết quả.
- Bố trí đối chứng hồng cầu: nhỏ vào mỗi giếng của đĩa 96 giếng 50 µl dung dịch nước muối sinh lý 0,9% và 50 µl dung dịch hồng cầu 0,5%.
3.5.4.3 Đọc kết quả phản ứng
- Phản ứng dương tính: hồng cầu bị ngưng kết thành mảng mỏng đều dưới đáy giếng, hoặc hồng cầu tản mạn xung quanh thành hình mạng lưới hay hình sao. Khi nghiêng đĩa không thấy hồng cầu chảy thành dòng.
- Phản ứng âm tính: không có hiện tượng ngưng kết hồng cầu, hồng cầu lắng xuống đáy thành cục tròn đỏ giống giếng đối chứng hồng cầu, khi nghiêng đĩa thấy hồng cầu chảy thành dòng.
- Hiệu giá phản ứng HA: là độ pha loãng virus cao nhất mà ở đó vẫn còn virus gây ngưng kết hồng cầu, người ta gọi đó là một đơn vị HA (HAU).