Chúng tôi tiến hành phân lập đồng thời vi khuẩn MRSA cùng với vi khuẩn
S. aureus. Sau khi 82 mẫu tăm bông ngoáy mũi lợn được tăng sinh trong 5ml BPW, sau 24h lấy 1 vòng que cấy 10µl dịch mẫu đã tăng sinh cấy vào môi trường đặc hiệu Chrom agar và nuôi cấy trong tủ ấm 370C trong 24h. Kết quả khuẩn lạc dương tính trên môi trường Chrom agar được thể hiện ở bảng 4.6.
Bảng 4.6. Kết quả phân lập MRSA trên môi trƣờng Chromagar MRSA
Lần kiểm tra Số mẫu kiểm tra Số mẫu (+)* Tỷ lệ (%)
1 22 3 3,66
2 30 7 23,33
3 30 12 17,07
Tổng 82 22 32,93
Ghi chú: * mẫu (+) là mẫu có khuẩn lạc tròn, trơn có màu hồng hoặc hồng tím
Từ 22 mẫu nghi ngờ dương tính, chúng tôi chọn ra 54 khuẩn lạc tiếp tục tiến hành khẳng định sự có mặt của MRSA bằng phản ứng multiplex PCR . Kết quả được tổng hợp trong bảng sau:
Bảng 4.7. Kết quả kiểm tra MRSA bằng kỹ thuật Multiplex PCR
Multiplex PCR Số chủng kiểm tra Kết quả (+) Tỷ lệ (%)
Gen spa 54 16 29,63
Gen plv 54 0 0
Gen mecA 54 8 14,81
Gen mecALGA252 54 0 0
Xác nhận 54 8 14,81
Qua kết quả kiểm tra tìm thấy có 16 chủng mang gen spa, 8 chủng mang gen mecA, không tìm được chủng nào mang gen plv và mecALGA252. Xác nhận lại có 8 chủng thuộc 5 mẫu được xác định là MRSA.
Hình 4.2. Kết quả kiểm tra bằng phản ứng Multiplex PCR một số chủng MRSA phân lập đƣợc tại tỉnh Bắc Ninh
Hình 4.3. Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn MRSA ở hộ chăn nuôi lợn tại Bắc Ninh
Qua hình ta thấy 5 mẫu trên 82 mẫu nhiễm MRSA (6,1%). Nghiên cứu về vi khuẩn Staphylococcus aureus kháng Methicillin ở lợn và người chăn nuôi lợn tại Otario, Canada tiến hành năm 2007 cho kết quả tỷ lệ lưu hành vi khuẩn MRSA trên lợn tại đây là 24.9% (71/285 mẫu). Có sự khác biệt giữa 2 kết quả có thể do loại mẫu thu thập và thời điểm thu thập mẫu tại mỗi môi trường khác nhau. Kết quả này phù hợp với nghiên cứu về vi khuẩn MRSA ở Châu Âu thực hiện từ năm 1999-2002 chỉ ra tỷ lệ nhiễm MRSA thấp nhất ở Bắc Âu và tỷ lệ mắc cao nhất ở miền nam châu Âu, cụ thể là thấp nhất ở Iceland (0.5%) và cao
6.1%
93.9%
Tỷ lệ nhiễm Tỷ lệ không nhiễm
nhất ở Hy Lạp (44%). Các nước khác có tỷ lệ nhiễm MRSA như sau: Úc (8.8%), Croatia (36.7%), Italya (40,9%),... Trong nghiên cứu chỉ ra tỷ lệ MRSA tăng đáng kể ở Bỉ (từ 22% năm 1999 lên 27% năm 2002), Ireland (39% - 45%), Đức (9 % - 19%), Hà Lan (0,4% - 1%) và Vương quốc Anh (31% - 45%). Tỷ lệ MRSA chỉ giảm đáng kể ở Slovenia, từ 22% năm 2000 xuống 15% năm 2002 (Edine W Tiemersma, Stef Lam Bronzwaer et al., 2004).