5.1. KẾT LUẬN
5.1.1. Kết quả điều tra tình hình sử dụng kháng sinh cho lợn tại Bắc Ninh
- Kết quả cho thấy trong 110 hộ được khảo sát trong thời gian điều tra thì có 85 hộ chiếm 77.3% có lợn bị ốm và trong số đó có 77 hộ chiếm 70% đã sử dụng thuốc kháng sinh để điều trị cho lợn ốm.
- 54,6% các hộ chăn nuôi lợn được điều tra sử dụng phối hợp nhiều loại kháng sinh để điều trị bệnh cho lợn, kháng sinh đơn được sử dụng rất ít. 53.6% hộ chăn nuôi đã dùng liều theo đúng hướng dẫn của nhà sản xuất, bên cạnh đó có 44.3% đã dùng tăng hơn so với hướng dẫn và chủ yếu là tăng từ 1 - 2 lần (86.04%). Trong các hộ mua thuốc kháng sinh về sử dụng thì có tới 51.5% hộ không sử dụng hết lượng thuốc đã mua.
5.1.2. Kết quả phân lập vi khuẩn S. aureus và MRSA
Vi khuẩn S. aureus được phát hiện ở 11 trong tổng số 82 mẫu thu thập được, chiếm tỷ lệ 13,41% . Vi khuẩn MRSA được phát hiện ở 5/82 mẫu, chiếm 6.1%.
5.1.3. Kết quả kiểm tra khả năng mẫn cảm của S. aureus và MRSA
Vi khuẩn S. aureus phân lập được mẫn cảm hoàn toàn (100%) với 3 loại kháng sinh, bao gồm: Linezolid, Rifampin, Fusidic acid. Tuy vậy, S. aureus
kháng với 7 loại kháng sinh trong đó có tới 4 loại đã kháng tuyệt đối (100%) bao gồm: Penicillin G, Erythromycin, Clindamycin và Kanamycin. 3 loại kháng với tỷ lệ cũng cao là Norfoxacin (54,55%), Tetracyclin (81,82%) và Trimethoprim - Sulfamethoxazole (72,73%).
Vi khuẩn MRSA phân lập được mẫn cảm hoàn toàn (100%) với kháng sinh: Linezolide, Rifampin và Fusidic acid. MRSA đã kháng tuyệt đối với: Penicillin, Erythromycin, Clindamycin và Kanamycin. Với các kháng sinh còn lại thì tỷ lệ kháng cũng khá cao: Norflorxacin đã kháng 60%,Trimethoprim- Sulfamethoxazole kháng 60% và với Tetracyclin tỷ lệ kháng lên đến 80%.
5.2. KIẾN NGHỊ
Cần tăng cường hướng dẫn, tập huấn cho người chăn nuôi hiểu rõ hơn về mức độ nguy hiểm của việc kháng kháng sinh để dẫn đến hạn chế điều trị bệnh
theo kinh nghiệm, nên xác định độ mẫn cảm của mầm bệnh với kháng sinh sử dụng trên địa bàn để sử dụng thuốc kháng sinh sao cho hiệu quả nhất.
Cần giám sát chặt chẽ hơn nữa việc mua, bán sử dụng thuốc kháng sinh trong điều trị bệnh cho vật nuôi và bổ sung vào thức ăn chăn nuôi, không sử dụng kháng sinh cấm, không rõ nguồn gốc, sử dụng đúng, đủ liệu trình thuốc tránh lãng phí, gây ô nhiễm môi trường chăn nuôi.
Cần thực hiện các nghiên cứu sâu hơn về S. aureus và MRSA xác định tỉ lệ nhiễm, tỷ lệ kháng kháng sinh của vi khuẩn này và mối liên hệ giữa chúng với tỷ lệ nhiễm và kháng kháng sinh trên người đặc biệt là người trực tiếp chăn nuôi lợn.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
I. Tài liệu tiếng Việt:
1. Bùi Thị Tho (2003). Thuốc kháng sinh và nguyên tắc sử dụng trong chăn nuôi thú y. NXB Nông nghiệp, Hà Nội.
2. Dương Thị Toan và Nguyễn Văn Lưu (2015). Tình hình sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi lợn thịt, gà thịt ở một số trại chăn nuôi trên địa bàn tỉnh Bắc Giang. Tạp chí Khoa học Nông nghiệp Việt Nam(5).tr.717.
3. Euge'nie Bergogne-Berezin and Pierre Dellamonica (2004). Kháng sinh trị liệu trong thực hành lâm sàng.
4. Eugénie Bergogne-Bérézin and Pierre Dellamonica (2004). Kháng sinh trị liệu trong thực hành lâm sàng. Nhà xuất bản Y học, Hà Nội. Susceptible Staphylococcus aureus
in a Patient during Antibiotic Therapy, PLoS ONE 5(7): e11841.
5. Kiều Khắc Đôn và Nguyễn Lệ Phi (1999). Giáo trình Vi sinh học, Trường đại học Dược Hà Nội.
6. Nguyễn Đỗ Phúc (2013). Staphylococcus aureus.
7. Nguyễn Minh Trí (2000). Khảo sát nồng độ ức chế tối thiểu của các kháng sinh thường dùng trên 5 loại vi khuẩn gây nhiễm trùng cộng đồng tại bệnh viên Chợ Rẫy , Luận văn thạc sĩ y học, Ðại học Y dược TP HCM.
8. Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên và Trần Thị Lan Hương (1997). Giáo trình vi sinh vật thú y. NXB Nông nghiệp, Hà Nội.
9. Nguyễn Vĩnh Phước (1978). Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc. NXB Nông nghiệp, Hà Nội.
10. Nguyễn Xuân Thành, Vũ Hoàn, Nguyễn Thị Minh và Hoàng Hải (2005). Giáo trình thực tập vi sinh vật. NXB Nông nghiệp, Hà Nội.
11. Phan Nữ Đài Trang, Vũ Lê Ngọc Lan, Uông Nguyễn Đức Ninh và Cao Hữu Nghĩa (2016). Khảo sát tỉ lệ kháng kháng sinh và gen quy định độc tố exfoliative toxins của các chủng Staphylococcus aureus phân lập tại Viện Pasteur TP. HCM. Tạp chí Phát triển Khoa học và Công nghệ. 19(3T).tr. 15-23.
12. Văn Tần (2005). Những tiến bộ về nhiễm khuẩn trong ngoại khoa tại Bệnh viện Bình Dân (2000-2004). Tạp chí Y học Thực hành. Hội thảo khoa học chống nhiễm khuẩn tháng 8(2005).tr. 71-81.
13. Vũ Thị Kim Cương (2007). Khảo sát tình hình kháng kháng sinh của các vi khuẩn gây nhiễm khuẩn bệnh viện tại bệnh viện Thống Nhất từ 15/10/2004 đến 30/6/2005, Luận văn thạc sĩ y học, Đại học Y dược TP.HCM.
II. Tài liệu tiếng Anh:
14. Aj D.N., M.V.D. Broek, E. Spalburg, M.V.S. Verheuvel, W.D. Deisz, H. Boshuizen, A.V.D. Giessen, E. V. Duijkeren and X.W. Huijsdens (2007). High prevalence of methicillin resistant Staphylococcus aureus in pigs. Veterinary microbiology 122(3-4): 366-372.
15. Ám S., P.S. Andersen, A. Kearns, B. Pichon, M. Holmes, G. Edwards, F. Laurent, C. Teale, R. Skov and A.R. Larsen (2012). Rapid detection, differentiation and typing of methicillin‐resistant Staphylococcus aureus harbouring either mecA or the new mecA homologue mecALGA251. Clinical Microbiology and Infection 18(4): 395-400.
16. Andreas V., F.Loeffen, J.Bakker, C.Klaassen and M. Wulf (2005). Methicillin-resistant
Staphylococcus aureus in pig farming. Emerging infectious diseases 11(12): 1965. 17. Annalisa P., S. Andrea and M. Monaco (2007). Mechanisms of antibiotic
resistance in Staphylococcus aureus.
18. Berger-Bächi B. (1999). Genetic basis of methicillin resistance in Staphylococcus aureus. Cellular and Molecular Life Sciences CMLS 56(9-10): 764-770.
19. Chambers H. F. (2001). Methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Mechanisms of resistance and implications for treatment. Postgrad Med 109(2 Suppl): 43-50. 20. Chambers H.F. (2001). Methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Mechanisms of
resistance and implications for treatment. Postgraduate medicine 109(2 Suppl): 43-50. 21. Christiane C., L. Franziska, S. Birgit and W. Wolfgang (2011). Rare occurrence of methicillin-resistant Staphylococcus aureus CC130 with a novel mecA homologue in humans in Germany. PloS one 6(9): e24360.
22. Collins C.H. (1995). Page 110 in Collins and Lyne's Microbiological Methods, Butterworth-Heinemann, UK.
23. Deurenberg R.H., V. Cornelis, C. Driessen, B. Michèle, L. Nancy, J. Etienne and E. E Stobberingh (2004). Rapid detection of Panton-Valentine leukocidin from clinical isolates of Staphylococcus aureus strains by real-time PCR. FEMS microbiology letters 240(2): 225-228.
24. Duarte C. O. and H.D. Lencastre (2002). Multiplex PCR strategy for rapid identification of structural types and variants of the mec element in methicillin-resistant
Staphylococcus aureus. Antimicrobial agents and chemotherapy 46(7).pp. 2155-2161. 25. En Iso (1999). 6888-1 (1999): Microbiology of food and animal feeding stuffs.
Horizontal method for the enumeration of coagulase-positive staphylococci (Staphylococcus aureus and other species). Part 1: Technique using Baird-Parker agar medium. International Organization for Standardization, Geneva.
26. Enright M. C., D. A. Robinson, G. Randle, E. J. Feil, H. Grundmann and B. G. Spratt (2002). The evolutionary history of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Proc Natl Acad Sci U S A 99(11): 7687-7692.
27. Franklin D. L. (2003). Antimicrobial resistance: the example of Staphylococcus aureus. The Journal of clinical investigation 111(9): 1265-1273.
28. Harmsen D., H. Claus, W. Witte, J. Rothgänger, H. Claus, D. Turnwald and U. Vogel (2003). Typing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in a university hospital setting by using novel software for spa repeat determination and database management. Journal of clinical microbiology 41(12): 5442-5448. 29. Jennifer D. B. , J.A. Hindler, H.S. Gold and B. Limbago (2014). Rationale for
eliminating Staphylococcus breakpoints for β-lactam agents other than penicillin, oxacillin or cefoxitin, and ceftaroline. Clinical infectious diseases 58(9): 1287-1296. 30. Jensen S. O. and B. R. Lyon (2009). Genetics of antimicrobial resistance in
Staphylococcus aureus. Future Microbiol 4(5).pp. 565-582.
31. Kenneth T. (2005). Todar’s online textbook of bacteriology. University of Wisconsin-Madison Department of Bacteriology.
32. Khanna T., R. Friendship, C. Dewey and J. Weese (2008). Methicillin resistant
Staphylococcus aureus colonization in pigs and pig farmers. Veterinary microbiology 128(3-4): 298-303.
33. Lowy F. D. (2003). Antimicrobial resistance: the example of Staphylococcus aureus. J Clin Invest 111(9): 1265-1273.
34. Luca G., M. Stegger and S. Robert (2007). Retrospective detection of methicillin resistant and susceptible Staphylococcus aureus ST398 in Danish slaughter pigs. Veterinary microbiology 122(3-4): 384-386.
35. Mark C. E., D. A. Robinson, G. Randle, E.J. Feil, H. Grundmann and B.G. Spratt (2002). The evolutionary history of methicillin-resistant Staphylococcus aureus
36. Mary K. S. and L. M. John (2002). Virulence and recovery of Staphylococcus aureus relevant to the food industry using improvements on traditional approaches. Food Control 15(1): 5-10.
37. Muhannad F. A. K. (2007). Jawetz, Melnick & Adelberg’s Medical Microbiology 24th Edition. Sultan Qaboos University Medical Journal [SQUMJ] 7(3): 273-275. 38. Normanno G., A. Firinu, S. Virgilio, G. Mula, A. Dambrosio, A. Poggiu, L.
Decastelli, R. Mioni, S. Scuota and G. Bolzoni (2005). Coagulase-positive Staphylococci and Staphylococcus aureus in food products marketed in Italy. International journal of food microbiology 98(1): 73-79.
39. Pantosti A., A. Sanchini and M. Monaco (2007). Mechanisms of antibiotic resistance in Staphylococcus aureus. Future Microbiol 2(3): 323-334.
40. Rijen M. V., P. V. Keulen and J. Kluytmans (2007). Increase of pig-and calf-related Mrsa in a Dutch hospital: P1591. Clinical Microbiology & Infection 13: S446-S447. 41. Sahebnasagh R., H. Saderi and P. Owlia (2011). Detection of methicillin-resistant
Staphylococcus aureus strains from clinical samples in Tehran by detection of the mecA and nuc genes. The First Iranian International Congress of Medical Bacteriology. 42. Schenck L. P., M. G. Surette and D. M. Bowdish (2016). Composition and immunological significance of the upper respiratory tract microbiota. FEBS Lett 590(21): 3705-3720.
43. Uwe Wollina (2017). Microbiome in atopic dermatitis. Clinical, cosmetic and investigational dermatology 10: 51.
44. Weese J. S., M. Archambault, B. Willey, H. Dick, P. Hearn, B. Kreiswirth, B. Said-Salim, A. Mcgeer, Y. Likhoshvay and J.F. Prescott (2005). Methicillin- resistant Staphylococcus aureus in horses and horse personnel, 2000-2002. Emerging infectious diseases. 11(3).pp. 430.
45. Edine W Tiemersma, Stef Lam Bronzwaer, Outi Lyytikäinen, John E Degener, Paul Schrijnemakers, Nienke Bruinsma, Jos Monen, Wolfgang Witte, Hajo Grundmann and European Antimicrobial Resistance Surveillance System Participants (2004). "Methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Europe, 1999-2002." Emerging infectious diseases 10(9): 1627.
PHỤ LỤC 1
LỊCH TRÌNH SỬ DỤNG KHÁNG SINH CHO LỢN
(Nhật kí chăn nuôi dùng để thu thập các thông tin về đàn lợn đang tham gia nghiên cứu VIDA-PIG)
Ngày bắt đầu theo dõi: [______/_______/_______] Tổng đàn lợn:
Số lợn nái: Số lợn con: Số lợn thịt:
Người chăn nuôi có thể cập nhật thông tin bất kì ngày nào trong tuần. Nhưng chúng tôi khuyến khích người chăn nuôi tổng hợp thông tin của một tuần vào ngày thứ hai mỗi tuần. Nghĩa là một tuần sẽ bắt đầu từ thứ hai và kết thúc hết ngày chủ nhật. Sổ được thiết kế để theo dõi đàn lợn trong vòng 4 tuần. Nếu anh/chị cần thêm sổ, vui lòng liên hệ nhân viên thú y của dự án để được hỗ trợ.
Thông tin thu thập này rất hữu ích trong việc đánh giá hiệu quả việc chăn nuôi tại trang trại và dùng để so sánh với các trại khác cùng tham gia nghiên cứu này. Các thông tin cần lưu trữ bao gồm:
Thông tin về các loại vắc xin được sử dụng trong quá trình phòng bệnh cho đàn lợn Các thông tin về bệnh, triệu chứng, tỉ lệ bệnh, chết …
Thông tin về việc sử dụng kháng sinh trong phòng và điều trị bệnh cho đàn lợn Thông tin về các loại thuốc khác và chất bổ trợ được sử dụng trong quá trình chăn nuôi lợn
Các anh/ chị vui lòng ghi riêng biệt thông tin của:
Thuốc kháng sinh và các loại thuốc khác. Các anh chị có thể hỏi người bán thuốc và bác sỹ thú y để ghi nhận được chính xác
Thức ăn công nghiệp và các loại thức ăn bổ sung khác
1. Số lợn bệnh và chết: Anh chị vui lòng đánh dấu vào ô có dấu hiệu bệnh. Và ghi số lượng lợn bị bệnh, lợn bị chết do bị bệnh hoặc lợn chết đột ngột.
Ngày lợn bị bệnh Số lợn bệnh chết vì Số lợn bệnh Số lợn chết đột ngột (không có dấu hiệu bệnh)
Dấu hiệu bệnh ( đánh nhiều cột nếu có nhiều loại bệnh khác nhau) Ho Tiêu chảy Nôn Bỏ ăn Dấu hiệu khác
Miêu tả dấu hiệu khác nếu có:
2. Thuốc kháng sinh: Anh/chị vui lòng ghi lại các thông tin về thuốc kháng sinh dùng để phòng và trị bệnh trong tuần. Anh/chị vui lòng hỏi rõ người bán thuốc thú
y thuốc nào là thuốc kháng sinh và giá của từng loại thuốc. Tên của thuốc kháng sinh (mỗi loại thuốc ghi 1 dòng) Hàm lƣơ ̣ng (ghi trên bao bì) Số thuốc đã mua (vd: 1 bịch/1 lọ) Liều lƣợng thuốc sử dụng/ lần Trọng lƣơ ̣ng lơ ̣n đƣơ ̣c điều tri ̣ Số lần sƣ̉ dụng/ ngày Số ngày sử dụng Số thuốc đã sử dụng (vd: nửa gói) Từ: / đến: /
3. Các thuốc khác hoặc các chất bổ trợ: Anh/chị vui lòng ghi lại các thông tin về thuốc khác và tất các các chất dùng để phòng và trị bệnh cho lợn trong tuần.
Tên của thuốc khác/chất bổ
trợ/thức ăn công nghiệp
(mỗi loại thuốc ghi 1 dòng) Hàm lƣơ ̣ng (ghi trên bao bì) Số thuốc đã mua (vd: 1 bịch/1 lọ) Liều lƣợng thuốc sử dụng/ lần Trọng lƣơ ̣ng lơ ̣n đƣơ ̣c điều tri ̣ Số lần sƣ̉ dụng/ ngày Sử dụng thuốc trong bao nhiêu ngày Số thuốc đã sử dụng (vd: nửa gói) Từ: / Đến
PHỤ LỤC 2
GIÁM ĐỊNH ĐẶC TÍNH SINH HOÁ VI KHUẨN STAPHYLOCOCUS AUREUS 1. Phản ứng catalase
Dùng que cấy lấy khuẩn lạc từ môi trường thạch đặt lên một điểm trên phiến kính sạch. Nhỏ một giọt dung dịch H2O3. Phản ứng dương tính khi thấy có hiện tượng sủi bọt sau vài giây. Phản ứng âm tính khi không có hiện tượng sủi bọt.
2. Phản ứng đông vón huyết tƣơng
Phản ứng đông vón huyết tương trong ống nghiệm: lấy 0,5ml huyết tương thỏ cho vào ống nghiệm, cấy khuẩn lạc nghi ngờ vào ống và để vào tủ ấm 370C. Phản ứng dương tính xuất hiện sau 2h đến 18h, huyết tương đông vón hoàn toàn hoặc ở dạng bán cố thể.
3. Lên men đƣờng manitol
- Chuẩn bị môi trường
Pha canh thang pepton theo hướng dẫn
Chuẩn bị chỉ thị màu: nghiền fuchsin, hoà vào nước cho tan hết, cho từ từ dung dịch NaOH 1N, vừa cho vừa lắc đều đến khi chuyển màu từ đỏ tươi sang đỏ nâu, đến vàng úa, vàng thẫm thì dừng (thường từ 12ml đến 17ml). Để lắng 1h đến 2h, lọc qua giấy lọc. Hấp 1200
C trong 15 phút.
Cho 1ml chỉ thị màu Andrate vào 100ml môi trường canh thang peptone, chia ra các ống (mỗi ống 4ml). Hấp 1200
C trong 30 phút.
Chuẩn bị đường: các loại đường pha thành dung dịch10% hấp 1100
C trong 15 phút đến 20 phút hoặc lọc qua màng lọc có kích thước lỗ lọc 0,45µm.
Cho đường vào các ống môi trường: mỗi ống 4ml cho 0,3ml dung dịch đường 10% - Phương pháp kiểm tra và đọc kết quả
Cấy vi khuẩn đã nuôi cấy thuần khiết vào các ống canh thang peptone có đường, để tủ ấm 370C sau 24h đọc hết quả
Phản ứng âm tính: môi trường không thay đổi màu. Phản ứng dương tính: môi trường chuyển màu đỏ.
CÁCH PHA CHẾ MỘT SỐ MÔI TRƢỜNG
1. Chuẩn bị môi trƣờng Baird - Parker
Hoà tan 58.0 g môi trường (BK 055) trong 950ml nước cất. Đun sôi từ từ, khuấy đều liên tục đến khi tan hoàn toàn. Cho vào các lọ 95ml/lọ.
Tiệt trùng trong nồi hấp ở 1210
C trong 15 phút. Làm lạnh và duy trì ở 44 - 470C.
Bằng kĩ thuật vô trùng thêm 5ml Egg Yolk Tellurite Enrichment (BS060) mỗi flash. Trộn nhanh và triệt để.
Đổ vào các đĩa petri vô trùng.
Làm khô các đĩa trong tủ ấm vô trùng.
2. Chuẩn bị thạch CHROMagar
- Chuẩn bị môi trường
Hoà tan chậm 82,5g bột khô CHROMagar MRSA base trong 1L nước cất Khuấy đều cho đêns khi agar nở ra
Gia nhiệt và đun sôi 1000
C Làm nguội đến 45-500
C Xoáy hoặc khuấy nhẹ - Chuẩn bị Supplement
Pha chất bổ sung CHROMagar MRSA Supplement với 20ml nước cất vô trùng. Lắc nhẹ, thêm 1ml chất bổ sung CHROMagar MRSA Supplement vào môi trường CHROMagar MRSA đã chuẩn bị ở trên
- Đổ đĩa
Đổ đĩa thạch và để môi trường nhiệt độ phòng 20 phút