VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU
3.1.1. Đối tượng nghiên cứu - Đàn lợn nuôi. - Đàn lợn nuôi.
- Các hộ chăn ni(có dịch và khơng có dịch) trên địa bàn một số xã thuộc tỉnh Hưng Yên.
- Một số yếu tố nguy cơ làm phát sinh và lây lan dịch. 3.1.2. Thời gian nghiên cứu
- Từ năm 2015-2016. 3.1.3. Địa điểm nghiên cứu
- Một số hộ chăn nuôi lợn trên địa bàn một số xã thuộc tỉnh Hưng Yên. - Bộ môn Dịch tễ và Bệnh lý - Viện thú y.
3.2. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
3.2.1. Nghiên cứu tình hình chăn ni, vệ sinh khử trùng, tiêm phòng và dịch tai xanh trong chăn nuôi lợn tại tỉnh Hưng Yên dịch tai xanh trong chăn nuôi lợn tại tỉnh Hưng Yên
Thu thập thông tin qua phiếu điều tra và phỏng vấn cán bộ thú y, người chăn ni. Các chỉ tiêu điều tra bao gồm:
- Tình hình chăn ni lợn: cơ cấu chăn ni, phương thức chăn nuôi. - Quản lý: công tác quản lý đàn, cơng tác vệ sinh thú y.
- Tình hình tiêm phịng và dịch Lợn tai xanh (2015-2016).
3.2.2. Nghiên cứu tỷ lệ huyết thanh dương tính với kháng thể virus PRRS lưu hành trong đàn lợn nuôi tỉnh Hưng Yên (2015-2016) lưu hành trong đàn lợn nuôi tỉnh Hưng Yên (2015-2016)
- Tỷ lệ huyết thanh dương tính với kháng thể virus PRRS trước tiêm phịng
(2015-2016).
- Tỷ lệ huyết thanh dương tính với kháng thể virus PRRS sau tiêm phịng (2015-2016).
3.2.3. Phân tích một số yếu tố nguy cơ làm phát sinh và lây lan dịch Lợn tai xanh tai xanh
- Địa điểm chăn nuôi: gần đường quốc lộ, gần chợ buôn bán gia súc, gia cầm sống.
- Phương thức chăn nuôi và công tác quản lý khu chăn nuôi: Thức ăn chăn nuôi, nguồn nước uống trong chăn nuôi, nguồn gốc con giống.
3.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.1. Lập phiếu điều tra và thu thập thông tin: 424 phiếu
Thông qua các phiếu điều tra phỏng vấn hộ chăn nuôi, thú y xã. Các chỉ tiêu theo dõi bao gồm:
Tình hình chăn ni lợn: Số lượng lợn trong một hộ chăn nuôi, nguồn giống, nguồn cung cấp thức ăn, phương thức chăn ni...
Tình hình vệ sinh: Chất lượng chuồng trại, vệ sinh chuồng trại, nguồn cung cấp nước, xử lý chất thải...
Tình hình dịch bệnh: xử lý khi có dịch, khử trùng tiêu độc chuồng trại khi có dịch, lấy mẫu xét nghiệm khi có dịch, tổng số lợn khi có dịch, số lượng lợn bị tiêu hủy...
Tình hình tiêm phịng: tỷ lệ tiêm phịng, thực hiện các quy định về thú y khi tiêm phịng.
3.3.2. Bố trí lấy mẫu huyết thanh và bảo quản Bảng 3.1. Địa điểm lấy mẫu
STT HUYỆN 2015 2016 Lợn chưa tiêm phòng Lợn đã tiêm phòng Lợn chưa tiêm phòng Lợn đã tiêm phòng 1 TP Hưng Yên 10 2 Ân Thi 10 30 20 20 3 Kim Động 10 30 20 20 4 Tiên Lữ 10 20 20 20 5 Phù Cừ 10 20 6 Khoái Châu 10 7 Mỹ Hào 10 8 Văn Giang 10 9 Văn Lâm 10 10 Yên Mỹ 10
Lấy 320 mẫu huyết thanh lợn và bảo quản theo QCVN 01-83: 2011/BNNPTNT.
3.3.3. Phương pháp ELISA
Sử dụng bộ kit PRRS-HERDCHECKX3 của IDEXX (theo hướng dẫn của nhà sản xuất).
Tóm tắt cách làm:
- Bước 1: Chuẩn bị bộ kit: số mẫu huyết thanh cần kiểm tra + 02 đối
- Bước 2: Pha loãng mẫu huyết thanh cần kiểm tra với tỷ lệ 1/40: 10 μl mẫu kiểm tra + 390 μl dung dịch pha loãng mẫu trong ống pha lỗng. Sau đó chuyển 100 μl dung dịch mẫu kiểm tra đã pha loãng sang đĩa ELISA với sơ đồ bố trí mẫu tương ứng.
* Nhỏ 100 μl đối chứng âm và đối chứng dương(không pha loãng) vào đĩa ELISA.
- Bước 3: Vỗ nhẹ đĩa, đậy nắp. Ủ ở nhiệt độ phòng trong 30 phút.
- Bước 4: Pha nước rửa đĩa 1X từ dung dịch rửa đĩa 10X có sẵn trong bộ kit với nước cất.
- Bước 5: Sau 30 phút ủ đĩa, đổ bỏ dung dịch trong đĩa, rửa đĩa 3 lần với lượng 300 μl/giếng bằng dung dịch rửa đĩa 1X.
- Bước 6: Nhỏ 100 μl chất gắn kết(conjugate) vào tất cả các giếng. Ủ tiếp đĩa ở nhiệt độ phòng trong 30 phút.
- Bước 7: Sau đó đổ bỏ dung dịch trong đĩa, rửa đĩa 3lần với lượng 300 μl/giếng bằng dung dịch rửa đĩa 1X.
- Bước 8: Nhỏ 100 μl cơ chất vào các giếng, ủ đĩa trong 15phút.
- Bước 9: Dừng phản ứng bằng cách cho100 μl dung dịch stop vào các giếng.
- Bước 10: Đọc đĩa ở bước sóng 650 nm và tính kết quả. Phản ứng được công nhận khi:
+ OD của đối chứng âm ≤ 0,15;
+ OD của đối chứng dương - OD của đối chứng âm ≥ 0,15.
S/P = (OD của mẫu – OD của đối chứng âm)/(OD của đối chứng dương - OD của đối chứng âm).
Đánh giá kết quả:
+ Mẫu dương tính: S/P không nhỏ hơn 0,4. + Mẫu âm tính: S/P nhỏ hơn 0,4.
3.4. PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU - Sử dụng phần mềm Microsoft Excel. - Sử dụng phần mềm Microsoft Excel.
- Theo phương pháp nghiên cứu bệnh - chứng.
- Sử dụng các phương pháp tính tốn thơng dụng, các cơng thức tính tốn trong dịch tễ.
- Để đưa ra kết luận yếu tố nguy cơ có liên quan đến việc phát sinh và lây lan dịch lợn tai xanh không, chúng tôi tiến hành theo các bước sau:
- Qui định:
+ Hộ có gia súc tiêm phịng vacxin PRRS khơng có kháng thể bảo hộ và hộ có gia súc phơi nhiễm(xét nghiệm dương tính huyết thanh học với kháng thể virus PRRS) là những hộ bệnh.
+ Hộ có gia súc tiêm phịng vacxin PRRS có kháng thể bảo hộ và hộ có gia súc xét nghiệm âm tính huyết thanh học với kháng thể virus PRRS là những hộ chứng.
- Đưa ra giả thuyết: Yếu tố nguy cơ không liên quan đến dịch lợn tai xanh có kí hiệu là Ho. Đối thuyết của H0 là H1. Tức là yếu tố nguy cơ có liên quan đến việc phát sinh và lây lan dịch lợn tai xanh.
- Lập bảng tương liên
Yếu tố nguy cơ Hộ bệnh Hộ chứng Tổng cộng
Phơi nhiễm với yếu tố nguy cơ
Có a B a+b
Không c D c+d
Tổng cộng a+c b+d a+b+c+d
Tỷ suất chênh lệch OR ad/bc Chitest(P-value)
Kết luận
- Kiểm định giả thuyết H0 bằng cách:
+ Tính tỉ suất chênh lệch OR (odds ratio):
OR = 2 1 Odd Odd = bc ad
Tỷ suất chênh của nhóm phơi nhiễm Odd 1=
b a
Tỷ suất chênh của nhóm khơng phơi nhiễm Odd 2=
d c
a: nhóm bệnh có phơi nhiễm
b: nhóm khơng bệnh có phơi nhiễm c: nhóm bệnh nhưng khơng phơi nhiễm d: nhóm khơng bệnh và khơng phơi nhiễm
Nếu OR = 1: Khơng có ảnh hưởng, khác nhau giữa hai nhóm OR > 1: Nguy cơ tăng
Khi tính bình phương, tìm giá trị xác suất P trong bảng khi bình phương để khẳng định chấp nhận hay không chấp nhận H0.
- Đưa ra kết luận:
+ Nếu giá trị xác suất P<0,05 thì loại bỏ giả thuyết H0, chấp nhận đối thuyết H1.
+ Nếu giá trị xác suất P>0,05 thì nghiên cứu khơng có ý nghĩa thống kê, tức là chưa tìm ra mối liên quan giữa yếu tố nguy cơ với việc phát sinh và lây lan dịch lợn tai xanh.