3. Nội dung nghiên cứu
2.1.2.Hoá chất, thiết bị
2.1.2.1. Hóa chất.
Hóa chất sử dụng trong thí nghiệm đều ở dạng tinh khiết và được cung cấp bởi các hãng khác nhau như: Đường glucose, cao nấm men, agar, cồn, nước cất, agarose, Tris-HCl, EDTA, acetic acid … có nguồn gốc từ Mỹ, Đức, Trung Quốc, Việt Nam… Kit tách DNA của hãng Thermofisher Scientific, Mỹ; Kit chạy PCR của hãng Phù sa, Việt Nam.
Môi trường phân lập và nhân giống:
- Môi trường sử dụng để phân lập và nhân giống là môi trường thạch khoai tây (Potato Dextrose Agar- PDA) bao gồm các thành phần như sau:
Khoai tây: 200-300 g Cao nấm men: 1 g/l
Glucose: 20 g/l
Agar: 15 g/l
- Trộn tất cả các thành phần và đưa về thể tích 1 lít. Khử trùng ở 121oC trong 15 phút, khi môi trường nguội bớt thì đổ đĩa thạch.
Môi trường lên men chìm:
- Môi trường lỏng ban đầu có thể dùng môi trường khoai tây lỏng (PD), các thành phần gồm như đối với môi trường thạch ngoại trừ không bổ sung thạch agar. Môi trường lên men lỏng cho các thí nghiệm tiếp theo gồm:
- Môi trường lỏng ban đầu được chuẩn bị dựa trên tham khảo của Lee và cs [18]. Cụ thể: Nguồn carbon: 40 g/l Nguồn nitơ: 20 g/l K2HPO4 : 0,46 g/l KH2PO4: 1,00 g/l MgSO4.7H2O: 0,5 g/l FeCl2 : 0,01 g/l MnCl2.4H2O : 0,036 g/l ZnCl2 : 0,03 g/l CuSO4.7H2O : 0,005 g/l Trộn tất cả các thành phần và đưa về thể tích 1 lít. Khử trùng ở 121oC trong 15 phút, khi môi trường nguội thì có thể cấy giống. Tùy thuộc vào một số quy mô và thiết bị, có thể bổ sung chất phá bọt ở nồng độ 50 ppm khi tiến hành lên men để hạn chế sự tạo bọt bên trong thiết bị.
2.1.2.2. Thiết bị.
Thiết bị sử dụng trong thí nghiệm đều mới, hiện đại và có độ chính xác cao như: Nồi hấp khử trùng Hariyama HV50- 220 (Nhật Bản), Box cấy ESCO class II (Indonesia), tủ sấy (Đức), bình tam giác 250ml (Đức), pipet Eppendorf (Đức), siêu điện (Trung Quốc), cân điện tử AND GH 200 (Nhật Bản), Ngoài ra, còn một số dụng cụ như: Bình tam giác 250ml, đĩa petri, đèn cồn, dao cấy, pipet eppendorf, đầu côn,...