- Nghiền 200mg mẫu lá trong cối với 250µl CTAB buffer (nghiền thật sánh, mịn).
- Cho thêm 500 µl CTAB (100 mM Tris-HCl pH 8,0; 20 mM EDTA pH 8,0; 1,4 M NaCl; 0,2% ß-mercaptoethanol và 160 µL CATB 10%), sau đó lấy hỗn hợp vào ống eppendorf.
- Ủ ấm ở nhiệt độ 60oC để CTAB dễ dàng phá vỡ thành tế bào, giải phóng DNA (5 phút lắc 1 lần, trong vòng 30 phút).
- Sau khi ủ, cho thêm 250 µl Chloroform : Isoamyl Alcohol (24:1).
- Lắc đều, nhẹ rồi đưa đi cân và cho vào máy ly tâm (12.000 vòng trong 5 phút). - Sau khi ly tâm lấy dung dịch phía trên sang một ống eppendorf mới, cho thêm 500 µl Absolute athanol đã được bảo quản lạnh, sau đó lắc đều, nhẹ cho vào ngăn đá của tủ lạnh.
- Sau 1 giờ lấy ống ra lắc đều rồi đem cân trước khi ly tâm (12.000 vòng trong 5 phút).
- Đổ phần nước trong ống sau khi ly tâm, cho 500 µl 70% Ethanol vào lắc đều, nhẹ để rửa sạch.
tục cho 500 µl 70% ethanol lắc đều, nhẹ để rửa sạch và đưa đi cân cho ly tâm (12.000 vòng trong 5 phút).
- Tiếp đó đổ phần nước ra và đem phơi khô.
- Sau khi phơi khô, cho vào mỗi ống 100 µl dung dịch TE, lắc đều, ủ ấm 65oC trong 20 phút (trong lúc ủ cứ 5 phút đưa ra lắc đều).
- DNA sau khi tách chiết sẽ được kiểm tra bằng phương pháp điện di trên agarose gel 1% trong dung dịch TBE 0,5X. DNA sẽ được nhuộm bằng dung dịch
Loading dye với với 10ml DNA : 10ml Loading dye, sau đó lắc đều và ủ tối 15 phút trước khi chạy điện di.
- Sản phẩm điện di được soi trên đèn UV và chụp ảnh.