3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn
2.3.2. Phân lập và định danh các nguồn nấm ký sinh rệp sáp, ve sầu hại cà phê
- Phân lập các nguồn nấm ký sinh rệp sáp, ve sầu hại cà phê
+ Phương pháp phân lập các nguồn nấm thu thập
Phân lập nấm theo phương pháp của Barnett và Barry (1972) và theo phương pháp của Viện Bảo vệ thực vật (1997).
- Cách 1: Khử trùng bề mặt mẫu vật bằng dung dịch cồn 50% trong 30 giây, sau đó nghiền mẫu trong cối sứ, thêm 1 đến 5 ml nước vô trùng, dùng micro pipet hút 0,1 ml cho vào đĩa môi trường và dùng trang thủy tinh trang kín bề mặt.
- Cách 2: Với mẫu vật có lớp bào tử nấm bên ngoài được quan sát là sạch thì tiến hành dùng que cấy lấy bào tử trên bề mặt côn trùng ký chủ và cấy trực tiếp vào đĩa môi trường.
- Cách 3: Dùng dao mổ cắt mẫu vật thành các mảnh nhỏ và lấy các mảnh nhỏ đặt lên bề mặt môi trường.
Môi trường dùng trong phân lập bao gồm WA, PDA.
- Định danh các nguồn nấm ký sinh rệp sáp, ve sầu hại cà phê tại Lâm Đồng.
Phương pháp định danh các chủng nấm thu thập được dựa vào đặc điểm hình thái của nấm. Các mẫu nấm sau khi phân lập tạo thuần được định danh theo khóa phân loại của Humber (1997), Samson (2004), Barnett và Barry (1972), Lawrence (1994).
Ký hiện mẫu: tên nấm + tên ký chủ + địa điểm thu mẫu Các chỉ tiêu theo dõi:
+ Đặc điểm khuẩn lạc nấm: hình dạng, màu sắc khuẩn lạc, sự phân bố và hình thành các vòng bào tử, đường kính khuẩn lạc nấm trên môi trường PDA.
+ Đặc điểm cơ quan sinh bào tử và hình dạng bào tử: mô tả và ghi nhận các đặc điểm cấu trúc cành bào tử, hình dạng bào tử.
+ Kích thước bào tử: Đường kính trung bình của bào tử được tính dựa trên số đo của hai đường chéo vuông góc của bào tử đối với bào tử có hình cầu hay hình trứng, đo chiều dài và chiều rộng đối với bào tử hình trụ hay hình hạt đậu.
- Đánh giá đa dạng về thành phần loài, tần suất xuất hiện của các chủng nấm ký sinh rệp sáp, ve sầu thu thập tại Lâm Đồng
Các loài nấm thu được trong khu vực điều tra được phân tích đánh giá theo % số loài thuộc các chi nấm.
Tần suất xuất hiện của các loài nấm được tính theo công thức:
Trong đó: Pi: là tần suất của loài nấm thứ i
Vi: là số lần xuất hiện của loài nấm thứ i Ni: là tổng số lượng mẫu nấm thu được
Căn cứ vào giá trị của Pi để phân thành 3 cấp độ bắt gặp như sau: + Loài ít phổ biến (ký hiệu: +): Pi <10%
+ Loài khá phổ biến (ký hiệu là ++): 10% ≤Pi ≤30% + Loài rất phổ biến (ký hiệu là +++): Pi >30%