Chƣơng 2 ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.6. Phƣơng pháp so sánh đối chiếu tiêu bản mô học
Sau khi thu nhận kết quả nhuộm mô học tiến hành so sánh, đối chiếu và đánh giá về mức độ tổn thƣơng da và xác định thời gian chiếu UV gây tổn thƣơng.
Nhuộm và quan sát hình thái mô học da: nhân tế bào xanh đến xanh đen; bào tƣơng tế bào hồng đến đỏ; hồng cầu hồng đậm; sợi tạo keo hồng nhạt [35].
Phương pháp đo độ dày biểu bì da chuột
Trên tiêu bản mô học tiến hành đo độ dày biểu bì, độ dày của lớp biểu bì đƣợc xác định bằng phƣơng pháp đo trực tiếp trên hình ảnh quan sát dƣới kính hiển vi quang học vật kính 40 (X40) với sự hỗ trợ của phần mềm S-Eye. Mẫu sau khi nhuộm đƣợc quan sát tổng thể dƣới kính hiển vi và tiến hành đo độ dày trực tiếp, với mỗi nghiệm thức đo 30 lát cắt, mỗi lát đo 10 lần và lấy độ dày trung bình của từng lát để tiến hành so sánh. Quá trình đo độ dày mỗi lát cắt đƣợc thực hiện qua các bƣớc nhƣ sau:
Quan sát tổng thể mẫu và loại bỏ các lát cắt bị lỗi, không đầy đủ các lớp cấu trúc cơ bản của da, lát cắt bị cuộn gấp và không bắt màu thuốc nhuộm.
Tiến hành đo độ dày biểu bì của từng lát cắt và thu nhận số liệu, độ dày biểu bì đƣợc tính từ vùng tế bào tím đậm (lớp sừng) đến vùng sợi màu hồng nhạt không có nhân (trung bì). Khoảng cách này đƣợc coi là tƣơng đối chính xác khi thanh ngang của thƣớc trùng với lớp tế bào ngoài cùng của lớp sừng, thanh còn lại nằm ở phần ranh giới giữa biểu bì và trung bì (hình 2.5).
Hình 2.5. Đo độ dày biểu bì dƣới kính hiển vi bằng phần mềm S-Eyes (X40)
Phương pháp đánh giá mức độ lão hoá da ở thông qua cấu trúc mô học
Qua hình thái mô học, mức độ lão hoá da chuột dƣới tác động của UV đƣợc đánh giá cảm quang trên mẫu da đƣợc nhuộm HE và quan sát dƣới kính hiển vi, đánh giá ở 4 mức độ lão hoá da thông qua đặc điểm cấu trúc của daở mỗi mức độ theo nhóm tự phân chia dựa trên tham khảo của [6], chi tiết đƣợc mô tả ở bảng 2.2.
Bảng 2.2. Đặc điểm cấu trúc da ở các mức độ lão hoá
Mức độ lão hoá Đặc điểm
Mức 0
(không lão hoá)
Collagen đồng nhất, nén chặt, sợi collagen nguyên vẹn, không bị đứt gãy, các bó sợi cuộn xoắn, liên kết chặt chẽ với nhau.
Biểu bì không có hoặc rất ít nếp nhăn [6]
Mức 1
(có dấu hiệu lão hoá)
Mật độ collagen bắt đầu không liên tục, xuất hiện một số đứt gãy trong cấu trúc.
Mức 2