CHƯƠNG 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.7. Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ lên hoạt tính của hợp chất
kháng khuẩn
Dựa vào phổ kháng khuẩn được xác định ở bước trên, 4 chủng vi khuẩn tiềm năng được lựa chọn để xác định độ bền nhiệt của hợp chất kháng khuẩn. Độ bền nhiệt là một đặc tính quan trọng nhằm đánh giá khả năng ứng dụng của hợp chất kháng khuẩn trong lĩnh vực nuôi trồng thủy sản. Theo đó, dịch ni cấy sau 24 giờ được ly tâm, phần dịch trong được ủ ở 60 ℃ và 80 ℃ trong vịng 60 phút, sau đó được làm lạnh nhanh. Dịch trước (đối chứng) và sau xử lý nhiệt được sử dụng để xác định hoạt tính kháng Vibrio parahaemolyticus còn lại bằng phương pháp khuếch tán đĩa thạch.
Dựa vào phổ kháng khuẩn được xác định ở bước trên, 4 chủng vi khuẩn tiềm năng được lựa chọn để xác định độ bền nhiệt của hợp chất kháng khuẩn. Độ bền nhiệt là một đặc tính quan trọng nhằm đánh giá khả năng ứng dụng của hợp chất kháng khuẩn trong lĩnh vực nuôi trồng thủy sản. Theo đó, dịch ni cấy sau 24 giờ được ly tâm, phần dịch trong được ủ ở 60 ℃ và 80 ℃ trong vịng 60 phút, sau đó được làm lạnh nhanh. Dịch trước (đối chứng) và sau xử lý nhiệt được sử dụng để xác định hoạt tính kháng Vibrio parahaemolyticus còn lại bằng phương pháp khuếch tán đĩa thạch. tinh sạch chất sau này. Theo đó, vi khuẩn được cấy ria từ môi trường bảo quản (–80 ℃) sang đĩa thạch LPMA, ủ ở nhiệt độ 30 ℃ qua đêm. Khuẩn lạc đơn được tăng sinh giống trong 10 ml canh trường LPMB, lắc ở nhiệt độ 30 ℃ qua đêm với tốc độ lắc 150 rpm. Khoảng 1 ml dịch nuôi cấy qua đêm được cấy chuyển vào bình tam giác thể tích 250 ml chứa 100 ml môi trường LPMB (tỷ lệ cấy giống 1 %), lắc ở nhiệt độ 30 ℃ với tốc độ lắc 120 vòng/phút trong vòng 48 giờ. Định kỳ, 5 ml dịch môi trường được thu nhận mỗi 3 giờ, ở các thời gian tương ứng là 3, 6, 9, 12, 24, 27 30, 33 và 48 giờ. Mật độ tế bào trong dịch môi trường được xác định thông qua giá trị OD 600 nm. Môi trường nuôi cấy được ly tâm ở 4.500 vòng/phút trong 20 phút, lọc qua màng PES 0,45 µm thu lấy dịch mơi trường vô khuẩn, dịch được cất giữ ở –20 ℃. Hoạt tính tiêu diệt V. parahaemolyticus và L. monocytogenes của môi trường