CHƯƠNG 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.8. Ảnh hưởng thời gian lên men đến khả năng sinh chất kháng khuẩn
khuẩn của vi khuẩn biển
Thí nghiệm được thiết kế nhằm lựa chọn thời gian lên men tối ưu mà tại đó vi khuẩn sinh chất kháng khuẩn ở nồng độ cao nhất cho việc thu nhận và tinh sạch chất sau này. Theo đó, vi khuẩn được cấy ria từ môi trường bảo quản (–80 ℃) sang đĩa thạch LPMA, ủ ở nhiệt độ 30 ℃ qua đêm. Khuẩn lạc đơn được tăng sinh giống trong 10 ml canh trường LPMB, lắc ở nhiệt độ 30 ℃ qua đêm với tốc độ lắc 150 rpm. Khoảng 1 ml dịch nuôi cấy qua đêm được cấy chuyển vào bình tam giác thể tích 250 ml chứa 100 ml môi trường LPMB (tỷ lệ cấy giống 1 %), lắc ở nhiệt độ 30 ℃ với tốc độ lắc 120 vòng/phút trong vòng 48 giờ. Định kỳ, 5 ml dịch môi trường được thu nhận mỗi 3 giờ, ở các thời gian tương ứng là 3, 6, 9, 12, 24, 27 30, 33 và 48 giờ. Mật độ tế bào trong dịch môi trường được xác định thông qua giá trị OD 600 nm. Môi trường ni cấy được ly tâm ở 4.500 vịng/phút trong 20 phút, lọc qua màng PES 0,45 µm thu lấy dịch môi trường vô khuẩn, dịch được cất giữ ở –20 ℃. Hoạt tính tiêu diệt V. parahaemolyticus và L. monocytogenes của môi trường
nuôi cấy được đánh giá bằng phương pháp khuếch tán đĩa thạch. Sơ đồ các nội dung nghiên cứu chính được thể hiện ở Hình 2.3.
Hình 2.3. Sơ đồ các nội dung nghiên cứu chính Vật liệu thí nghiệm Phân lập vi khuẩn Tuyển chọn chủng vi khuẩn đối kháng VSV chỉ thị Xác định bản chất của chất kháng khuẩn Xác định phổ kháng khuẩn Định danh vi khuẩn bằng sinh học phân tử, nghiên cứu mối quan hệ
phát sinh loài
Kết luận
Tuyển chọn chủng VKB sinh bacteriocin
Khảo sát thời gian lên men đến khả năng