Chuẩn bị tế bào cơn trùng Spodoptera frugiperda (Sf9)

Một phần của tài liệu Thiết kế Baculovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa protein M1 của virus cúm A H5N1 để tạo chủng sản xuất vaccine thế hệ mới bằng công nghệ virus like particle (Trang 54 - 55)

Tế bào đĩng vai trị then chốt trong sự thành cơng của đề tài. Việc nuơi cấy và duy trì tế bào địi hỏi phải tuân thủ một cách nghiêm ngặt hướng dẫn của nhà cung cấp để tránh làm tế bào bị sốc cả về mặt cơ học và sinh lý tế bào. Nếu tế bào yếu, sinh trưởng kém thì sẽ ảnh hưởng đến các thí nghiệm tiếp theo. Sau khi nhận tế bào cơn trùng Sf9, chúng tơi nuơi cấy để nhân dịng và sau đĩ bảo quản trong nitơ lỏng phục vụ cho các cơng việc của để tài như đã mơ tả ở phần vật liệu và phương pháp nghiên cứu. Mặc dù vậy, qúa trình nuơi cấy và cất giữ giống cĩ thể làm tế bào bị nhiễm trùng hoặc cĩ thể chết nếu các điều kiện bảo quản khơng đúng. Để kiểm tra xem tế bào cĩ bị ảnh hưởng sau qua trình cất giữ trong nitơ lỏng hay khơng cũng trạng thái của tế bào, chúng tơi tiến hành nuơi cấy lại tế bào đã bảo quản trong mơi trường thích hợp là Sf900 II SFM cĩ bổ sung 10% FBS trong chai nuơi cấy T25. Kết quả cho thấy, sau khi bảo quản trong nitơ lỏng tế bào vẫn sinh trưởng tốt, thể hiện ở tốc độ sinh trưởng nhanh và hình thái tế bào khơng bị biến đổi. Sau 3

ngày nuơi ở 28oC thì mật độ tế bào đạt 80-90% diện tích bề mặt của chai nuơi cấy, tế bào được quan sát dưới kính hiển vi và chụp ảnh (hình 3.8). Tế bào lúc này cĩ thể được dùng cho các các thí nghiệm tiếp theo.

Hình 3.7: Hình ảnh tế bào Sf9 sau 4 ngày nuơi cấy.

Tế bào Sf9 bám dính vào chai nuơi cấy và chiếm 70-80% diện tích đĩa nuơi cấy (trên kính hiển vi soi ngược độ phĩng đại 300 lần).

Một phần của tài liệu Thiết kế Baculovirus tái tổ hợp mang gen mã hóa protein M1 của virus cúm A H5N1 để tạo chủng sản xuất vaccine thế hệ mới bằng công nghệ virus like particle (Trang 54 - 55)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(75 trang)