Các k t qu nghiên cứu c n đ ợc phân tích và xửlí đểthông qua đó, ch ra các ý
nghĩa c a b ng k t qu . Với sự trợ giúp c a máy tính và các ph n m m chuyên d ng,
thi t k thí nghiệm và xử lí số liệu thực nghiệm đư trở nên nhẹ nhƠng vƠ đ n gi n h n
r t nhi u (Nguyễn Văn Dự và cs., 2011).
Minitab là một ph n m m máy tính giúp ta hiểu bi t thêm v thống kê và ti t kiệm thời gian tính toán.
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 21
Ph n m m nƠy ban đ u đ ợc thi t k để ph c v gi ng d y môn thống kê, sau đó đư đ ợc phát triển thành công c phân tích và trình bày dữ liệu r t hiệu qu .
Giao diện c a Minitab ở d ng đồ họa, với các menu và hộp tho i r t đ n gi n và dễ dùng, v n hƠnh nh một hộp đen, nh n dữ liệu đ u vào và phân tích, xử lý theo yêu c u c a ng ời sử d ng sau đó hiển th k t qu thông qua các các cửa sổ (Nguyễn Văn
Dự và cs., 2011).
− Dữ liệu nh p vào có thểđ ợc nh n thông qua nh p liệu trực ti p vào các cửa sổ
b ng tính hoặc l y file dữ liệu c a Minitab hoặc từ các ứng d ng b ng tính khác nh Excel hay Lotus thông qua chức năng sao chép ậ dán. NgoƠi ra Minitab cũng nh n nh p liệu từ Session Window thông qua các ngôn ngữ nh p lệnh c a Minitab.
− K t qu s là các k t qu bằng số, chữ và hình nh đồ th thông qua các cửa sổ
Minitab.
−Các đồ th mô t thống kê c a Minitab có hình thức trình bày r t rõ ràng, có thể
dễ dàng hiệu ch nh theo ý muốn. Các đồ th nƠy cũng có thể k t xu t ra nhi u d ng nh
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 22 Hình 1.9 Giao di n ph n m m Minitab 16.2.0
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 23 CHƯƠNGă2:
VẬT LIỆUăVẨăPHƯƠNG
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 24 2.1. THỜIăGIANăVẨăĐỊAăĐI M NGIÊN C U
- Thời gian: Từtháng 11/2013 đ n tháng 5/2014
- Đ a điểm: Phòng thí nghiệm Công Nghệ Vi Sinh-Tr ờng Đ i học Mở Thành phố Hồ Chí Minh.
2.2. VẬT LIỆU NGHIÊN C U 2.2.1. Đ iăt ng nghiên c u
Ch ng vi khuẩn Lactobacillus plantarum NT1.5 đ ợc cung c p từ Phòng thí nghiệm Công nghệ Vi sinhậTr ờng Đ i Học Mở Tp Hồ Chí Minh đư đ ợc chứng minh có kh năng lƠm gi m cholesterol và kh năng làm probiotic (D ng Nh t Linh và cs., 2013)
2.2.2. Môiătr ng ậ hóa ch t
Môi tr ờng MRS (Deman, Rogosa and Sharpe).
Môi tr ờng MRSA.
Cồn 96o, cồn 70o, H2SO4, NaOH, HCl.
Các lo i đ ờng: glucose, sucrose, maltose, m t r đ ờng, xylose, manitol.
Cao n m men, pepton, bột đ u nành, bột bắp, amonium sulfate ((NH4)2SO4), urê (H2NCONH2)
Các muối khoáng: NaCl, K2HPO4.3H2O, KH2SO4, MgSO4.7H2O, CaCl2, MnSO4.4H2O, CaCO3,
N ớc c t, n ớc muối sinh lý 0,85 %.
2.2.3. D ng c
Đĩa petri, ống nghiệm, erlen, becher, pipette, pipettman, đ u típ các lo i, , que c y, lam, lamer, đèn cồn, kính hiển vi, gi y đo pH.
2.2.4. Trang thi t b - T c y - T m CO2 - Nồi h p tiệt trùng - Kính hiển vi - Cân kỹ thu t - Cân phân tích
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 25
- T s y - Lò viba
- Máy đo pH
- Máy đo m t độ quang
2.3. PHƯƠNGăPHÁPăNGHIểNăC U 2.3.1. Ho t hóa ch ng
Từ ống giữ ch ng 20% glycerol/ -20o C, ti n hành ho t hóa ch ng Lactobacillus plantarum NT1.5 trên 5mL môi tr ờng MRS (DeMan Rogosa and Sharpe) ở 37oC / 24-48 giờ.
Từ ống môi tr ờng lỏng đư ho t hóa 24-48 giờ chúng tôi ti n hành c y ria trên
môi tr ờng MRSA (DeMan Rogosa and Sharpe agar), ở 37oC, 5%CO2, 48 giờ.
Sau 48 giờ chọn những khuẩn l c riêng lẻ, điển hình c y trên môi tr ờng th ch
đứng MRSA giữ ch ng cho các thí nghiệm ti p theo.
2.3.2. Xây d ng bi uăđ t ngăquanăgi a giá tr OD và n ngăđ t bào.
2.3.2.1. Định l ợng tế bào bằng ph ơng pháp đo OD
Nguyên t c
Khi một pha lỏng có nhi u phân tử không tan thì s hình thành một hệ huy n phù
vƠ có độ đ c bởi các ph n tử hiện diện trong môi tr ờng lỏng làm c n ánh sáng, làm phân tán chùm ánh sáng tới. T bào vi sinh v t là một thực thể nên khi hiện diện trong
môi tr ờng cũng lƠm môi tr ờng trở nên đ c. Độđ c c a huy n phù tỷ lệ với m t độ t bào. Trong một giới h n c a độđ c và m t độ t bào, có thể xác l p đ ợc quan hệ tỷ lệ
tuy n tính giữa m t độ t bƠo vƠ độ đ c. Do đó, có thể đ nh l ợng m t độ t bào một cách gián ti p thông qua đo độđ c bằng cách so màu ởcác b ớc sóng từ 550 ậ 610 nm (Tr n Linh Th ớc và cs., 2001).
Th c hi n
Ti n hành pha loãng huy n d ch vi khuẩn bằng môi tr ờng MRS sao cho thu
đ ợc các huy n d ch có giá tr OD610: 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5.
Thực hiện đ nh l ợng t bào bằng ph ng pháp đ m sốl ợng khuẩn l c.
Các giá tr OD610 t ng ứng đ ợc pha loãng và tr i trên đĩa môi tr ờng MRSA
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 26
Xây dựng đ ờng t ng quan giữa OD610 và m t độ t bƠo t ng ứng với các huy n phù bằng ph n m m Excel c a Microsoft.
2.3.2.2. Định l ợng tế bào bằng ph ơng pháp đếm khuẩn lạc
Ph ng pháp đ nh l ợng t bào bằng cách đ m khuẩn l c đ ợc ti n hành với các
b ớc sau: (Tr n Linh Th ớc và cs., 2001)
T i các nồng độ OD t n hành pha loãng b c 10 nh : 10-1
, 10-2, 10-3, 10-4, 10-
5,ầ
Tr i 0,1 mL huy n phù sau pha loưng lên đĩa môi tr ờng MRSA, mỗi nồng độ
pha loãng tr i 3 đĩa.
37oC/5% CO2, 24 -48 giờ.
Nh n diện khuẩn l c đặc tr ng vƠ đ m số khuẩn l c c a ch ng vi khuẩn
Lactobacillus plantarum NT 1.5 t i mỗi độ pha loãng: chọn độ pha loãng có số khuẩn l c phân bố hợp lý nh t và trong kho ng 25 ậ 250 khuẩn l c/ đĩa, đ m số khuẩn l c trên c 3 đĩa lặp l i trên cùng độ pha loãng.
Tính sốl ợng t bào có trong 1 mL m u theo công thức sau:
Trong đó:
A: M t độ t bào (CFU/ mL) N: Tổng số khuẩn l c đ m đ ợc
ni: Sốđĩa đ ợc đ m ở nồng độ pha loãng i V: Số mL d ch m u c y vào mỗi đĩa.
fi: nồng độ pha loãng có số khuẩn l c đ ợc chọn đ m.