2.3.3.1. Nguyên tắc
Sự tăng tr ởng c a vi sinh v t là sự gia tăng số l ợng t bào vi sinh v t trong qu n thể và tốc độtăng tr ởng là sự tăng tr ởng c a vi sinh v t trong một đ n v thời
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 27
gian. Một qu n thể vi sinh v t th ờng có những đặc tr ng tăng tr ởng riêng khi đ ợc nuôi c y trong một môi tr ờng vƠ đi u kiện nh t đnh.
Động thái tăng tr ởng c a vi sinh v t bắt đ u từ một pha ti m tàng (lag phase).
Sau đó, sự tăng tr ởng bắt đ u và số l ợng t bƠo tăng lũy ti n, giai đo n này gọi là pha log (log phase). Theo thời gian, nguồn dinh d ỡng trong môi tr ờng trở nên c n kiệt cùng với sựtích lũy c a độc ch t. Sự tăng tr ởng dừng l i vƠ đi vƠo pha ổn đ nh (stationary phase). N u ti p t c nuôi c y, các t bào bắt đ u ch t vƠ đi vào pha suy tàn (death phase). Mỗi lo i vi khuẩn l i có đ ờng cong tăng tr ởng riêng, do đó c n ph i
kh o sát đ ờng cong tăng tr ởng c a ch ng vi khuẩn đang quan tơm để xác đ nh đ ợc
thời gian thu nh n s n phẩm thích hợp (Nguyễn ThƠnh Đ t, 2011).
2.3.3.2. Thực hiện
Đi u ch nh d ch khuẩn đư ho t hoá đ t giá tr OD610 t ng đ ng 108 t bƠo/mL, sau đó hút 2 mL d ch khuẩn cho vƠo erlen chứa 18 mL môi tr ờng MRS. Nuôi d ch khuẩn ở 37o
C/5% CO2.
Theo dõi sự tăng tr ởng c a vi sinh v t ở các mốc 0 giờ, 3 giờ, 6 giờ, 9 giờ, 12 giờ, 15 giờ, 18 giờ, 21 giờ, 24 giờ, 27 giờ, 30 giờ, 33 giờ, 36 giờ, 39 giờ, 42 giờ, 48 giờ
bằng cách đo OD610để xác đ nh m t độ t bƠo sau mỗi thời gian nuôi c y.
Sử d ng đ ờng t ng quan giữa m t độ t bƠo vƠ OD610 để xác đ nh m t độ
t bƠo t i các giá tr OD610t ng ứng t i mỗi thời điểm kh o sát.
Dựa vƠo những mốc thời gian vƠ m t độ t bƠo, xơy dựng đ ờng cong tăng
tr ởng c a vi sinh v tbằng ph n m m Excel c a Microsoft.
2.3.4. Kh o sát nhi tăđ , pH thích h p cho s tĕngătr ng c a L. plantarum
NT1.5
M c đích
Xác đ nh đ ợc nhiệt độ vƠ pH thích hợp thu đ ợc nhi u sinh khối vi khuẩn nh t.
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 28
Ho t động trao đổi ch t c a vi sinh v t là k t qu c a các ph n ứng hóa học. Các ph n ứng này ph thuộc chặt ch vào nhiệt độ, do đó y u tố nhiệt độ nh h ởng sâu sắc
đ n quá trình sinh tr ởng và phát triển c a vi sinh v t. Vùng sinh tr ởng c a vi sinh v t là vùng giới h n giữa nhiệt độ cực đ i và nhiệt độ cực tiểu mà vùng này khác nhau giữa các loài.
pH lƠ đ i l ợng dùng để đo độ ho t tính c a ion H+ trong môi tr ờng. pH nh
h ởng đ n ho t động c a vi sinh v t là do sự tác động qua l i giữa ion H+ và các enzyme chứa trong thành t bào và màng t bào ch t. Mỗi loài vi sinh v t ch thích hợp sống trong kho ng pH nh t đnh. (Nguyễn Lơn Dũng vƠ cộng sự, 2000)
Ti n hƠnh
Đi u ch nh d ch khuẩn đư ho t hoá đ t giá tr OD t ng đ ng 108
t bào/mL, sau
đó hút 1 mL dch khuẩn vƠo 9 mL môi tr ờng MRS đ ợc đi u ch nh ở các giá tr pH
l n l ợt nh sau: 4, 5, 6, 7, 8 (Bevilacqua và cs., 2008).
Nuôi ở các nhiệt độ: 30o
C, 37oC, 40oC.
Mỗi thí nghiệm lặp l i 3l n.
Sau thời gian nuôi c y, d ch khuẩn đ ợc đo OD610 vƠ dựa vƠo đ ờng t ng quan
để xác đ nh m t độ t bƠo. K tăqu
Số liệu đ ợc xử lỦ thống kê ANOVA bằng ph n m m Statgraphics Plus 3.0 vƠ
Excel c a Microsoft.
K t qu đ ợc trình bƠy d ới d ng: trung bình sai số chuẩn.