Th iăgiană(gi ) Giáătr ăOD Log (N/ mL) M tăđ ă(CFU/ămL) 0 0.023 6,793 ± 0,007 6,2.106 3 0.074 6,875 ± 0,021 7,5.106 6 0.165 7,021 ± 0,011 1,1.107 9 0.321 7,271 ± 0,038 1,9.107 12 0.477 7,521 ± 0,042 3,3.107 15 0.804 8,045 ± 0,089 1,0.108 18 1.252 8,764 ± 0,062 6,0.108 21 1.364 8,943 ± 0,018 8,5.108 24 1.674 9,439 ± 0,087 2,7.109 27 1.697 9,477 ± 0,031 2,9.109 30 1.828 9,686 ± 0,031 4,9.109
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 58 33 2.028 10,007 ± 0,077 1,0.1010 36 1.9 9,802 ± 0,021 6,3.109 39 1.834 9,697 ± 0,094 5,0.109 42 1.24 8,744 ± 0.363 5,5.108 45 1.212 8,699 ± 0,455 5,0.108 48 0.912 8,219 ± 0,035 1,7.108
Đ th 3.9ăĐ ngăcongătĕngătr ng c a L. plantarum NT 1.5 theo th i
gianătrênămôiătr ng t iă u
Từ k t qu kh o sát kh năng tăng tr ởng c a ch ng L. plantarum NT1.5,
nh n th y trên môi tr ờng tối u vi khuẩn cho sinh khối cao nh t t i 33 giờ, sinh khối đ t đ ợc Log = 10,007 ± 0,077 (N/ mL) kho ng 1.1010t bƠo / mL. Trên môi
tr ờng MRS ch ng đ t đ ợc sinh khối cao nh t t i 18 giờ, nồng độ sinh khối đ t
đ ợc kho ng 1,3.1010t bƠo / mL (t ng ứng với log (N/ mL)=10,141) (theo b ng
3.2, m c 3.2).
Trên môi tr ờng tối u ch ng L. plantarum NT1.5 đ t đ ợc m t độ sinh khối cao
nh t ch m h n 15 giờ so với môi tr ờng MRS với m t độ t bƠo t ng đ ng.
Đi u nƠycho th y các y u tố trong thƠnh ph n môi tr ờng tối u đư xác đ nh đ ợc
0.000 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000 12.000 0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 Lo g (N / m L ) Th iăgiană(gi )
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 59
có nh h ởng tích cực đ n kh năng tăng tr ởng c a ch ng Lactobacillus
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 60
CH NG 4:
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 61 4.1 K T LUẬN
Sau thời gian thực hiện đ tài, với những k t qu thu đ ợc chúng tôi có k t
lu n nh sau:
Sự t ng quan tuy n tính giữa giá tr OD610 và m t độ t bƠo trên môi tr ờng
MRS theo ph ng trình y = 1,603x + 6,7566 với mức độ tin c y 96,17%.
Dựa vào đ ờng cong tăng tr ởng, xác đ nh đ ợc thời gian thu sinh khối c a L. plantarum NT 1.5 trên môi tr ờng MRS nhi u nh t là 24 giờ.
pH=7, 37oC lƠ pH môi tr ờng và nhiệt độ nuôi c y thích hợp cho sự tăng tr ởng c a L. plantarum NT1.5.
Từ các nguồn nit , cacbon, khoáng chọn đ ợc các y u tố: pepton, m t r
đ ờng, CaCO3, MgSO4, CaCl2, NaCl nh h ởng đ n kh năng tăng tr ởng c a vi khuẩn Thí nghiệm sàng lọc các y u tố nh h ởng chính P-B, xác đ nh đ ợc các y u tố chính nh h ởng đ n kh năng t o sinh khối c a ch ng là: Pepton, M t r đ ờng, MgSO4, CaCl2.
Xác đ nh đ ợc kho ng tối u c a các y u tố nh h ởng chính bằng thí nghiệm leo dốc tìm vùng cực tr là: Pepton: 14,6 ậ 17 (g/ L), M t r đ ờng: 36- 40 (g/ L), CaCl2: 2,3 ậ 2,5 (g/ L), MgSO4.7H2O: 0,19 ậ 0, 202 (g/ L).
Xác đ nh đ ợc giá tri tối u c a các y u tố nh h ởng chính bằng ph ng
pháp Box-Behnken:
Pepton: 16,1515 g/ L M t r đ ờng: 38,6667 g/ L CaCl2: 2,41515 g/ L
MgSO4.7H2O: 0,195091 g/ L
Xác đ nh đ ợc thời gian t o sinh khối nhi u nh t c a ch ng trên môi tr ờng tối u lƠ 33 giờ.
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 62
4.2 KI N NGHỊ
Với m c đích tối u hóa môi tr ờng lên men L. plantarum NT 1.5 để thu
đ ợc sinh khối vi khuẩn nhi u nh t và có hiệu qu kinh t cao. Chúng tôi đ ngh thực hiện các b ớc nghiên cứu ti p theo sau:
-Kh o sát các nguồn dinh d ỡng rẻ ti n thay th các nguồn dinh d ỡng hiện t i.
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 63
TÀI LIỆU THAM KH O
Ti ng Vi t
[1]. Nguyễn Tú Anh, Lê Th Mỹ Linh, Nguyễn Văn Thanh (2003), “Kh o sát đi u kiện nuôi c y thích hợp cho vi khuẩn Lactobacillus casei”, Tạp chí Y học TP. HCM,
Chuyên đềD ợc, 7(4), Tr. 195-197.
[2]. Nguyễn Đăng Diệp, Bùi Hà Thanh, (1994-1996), "Nghiên cứu các thông số thích hợp trong qui trình công nghệ lên men s n xu t ch phẩm vi khuẩn lactic", Tuyển tập công tác nghiên cứu Viện Sinh Học Nhiệt Đới, NXB Nông Nghiệp.
[3]. Nguyễn Lân Dũng (1983), Thực tập Vi sinh vật học, NXB Đ i học & Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội.
[4]. Nguyễn Văn Dự, Nguyễn Đăng Bình (2011), ” Quy hoạch thực nghiệm trong kỹ
thuật”, NhƠ xu t b n Khoa học và kỹ thu t Hà Nội, Tr.9-26, 138-216.
[5]. Nguyễn ThƠnh Đ t (2011), Cơ sở sinh học vi sinh vật tập 1, NXB Đ i học S
Ph m
[6]. Nguyễn Th Hồng Hà, Lê Thiên Minh, Nguyễn Thùy Chơu (2003), “Nghiên cứu công nghệ s n xu t ch phẩm vi khuẩn lactic probiotic”, Tuyển tập báo cáo tại Hội nghị Công nghệ Sinh học toàn quốc năm 2003, Tr. 251-255.
[7]. Giang Th Kim Liên (2009), Bài giảng Qui hoạch thực nghiệm (các ph ơng
pháp thống kê và xử lý số liệu thực nghiệm), Tr ờng Đ i Học ĐƠ Nẵng.
[8]. Mai ĐƠm Linh, Đỗ Minh Ph ng, Ph m Th Tuy t, Ki u Hữu nh, Nguyễn Th Giang (2008), “Đặc điểm sinh học c a các ch ng vi khuẩn lactic phân l p trên
đa bàn thành phố Hà Nội”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên và Công nghệ, 24, Tr.221-226.
[9]. D ng Nh t Linh, Nguyễn Văn Minh, Lê Th Anh Thiện, Ph m Tr n Ph ng
Dung, Ph m Th Minh Trang, Tr n Cát Đông (2013), “Sàng lọc vi khuẩn lactic có ho t tính gi m cholesterol”, Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc khu vực phía Nam lần III “Công nghệ sinh học vì cuộc sống”, Tr. 151.
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 64
[10]. Nguyễn Đức L ợng và Cao C ờng (2003), Thí nghiệm công nghệ sinh học tập 1- thí nghiệm hóa sinh học, Nhà xu t b n Đ i học quốc gia TP Hồ Chí Minh. [11]. Nguyễn Văn ThƠnh vƠ Nguyễn Ngọc Trai (2012), phân l p và tuyển chọn vi
khuẩn Lactobacillus sp. có kh năng ức ch vi khuẩn gây bệnh gan th n m và
đốm đỏ trên cá tra”, Tạp chí Khoa học, Pp. 224-234
[12]. Tr n Linh Th ớc, Nguyễn Đức Hoàng, Phan Th Ph ng Trang, Ph m Th Hồng T i (2001), Thực tập vi sinh vật, Nhà xu t b n Đ i học Quốc gia TP.HCM, Tr.15, 37, 39, 43.
[13]. Tr n Linh Th ớc, Đặng Th Ph ng Th o, Đỗ Anh Tu n, Cao Th Ngọc Ph ợng, Võ Cẩm Quy (2011), Thực tập vi sinh vật, Nhà xu t b n Đ i học Quốc gia Hồ
Chí Minh.
Ti ng Anh
[14]. Barthelmebs L., Divies C., and Cavin J. F. (2000), “Knockout of the p-coumarate decarboxylase gene from Lactobacillus plantarum reveals the existence of two othe inducible enzymatic activities involved in phenolic acid metabolism”, Appl. Environ. Microbiol, 66: Pp. 3368-3375.
[15]. Barthelmebs, L., Divies, C. and Cavin, J-F. (2001), “Molecular characterization
of the phenolic acid metabolism in the lactic acid bacteria Lactobacillus
plantarum”, Lait, 81:Pp. 161-171.
[16]. Bevilacqua A., Corbo M. R., Mastromatteo M. and Sinigaglia M. (2008),
“Combined effects of pH, yeast extract, carbohydrates and di-ammonium
hydrogen citrate on the biomass production and acidifying ability of a probiotic
Lactobacillus plantarum strain, isolated from table olives, in a batch system”,
World J Microbiol Biotechnol, 24:Pp. 1721ậ1729.
[17]. Daeschel M. A. and Nes I. F. (1995), Lactobacillus plantarum: physiology, genetics and applications in foods, in Food Biotechnology Microorganisms, New
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 65
[18]. David M. I., Weinert E., Kim C.S., Joseph M. M. and Sherri A. M. (2013),
“Natural Farming: Lactic Acid Bacteria”, College of Tropical Agriculture and
Human Resources”,
[19]. David D., Tryon V. V. and Dennis J. P. (1989), “Metabolism of Mollicutes: the
Embden-Meyerhof-Parnas Pathway and the Hexose Monophosphate Shunt”,
Journal of General Microbiology, Vol. 135, Pp.683-691.
[20]. FAO/WHO(2001), “Report of a joint FAO/WHO expert consultation on
evaluation of health and nutritional properties of probiotics in food including
powder milk with live lactic acid bacteria”, Co´rdoba, Argentina.
[21]. Farooq U., Anjum F. M., Zahoor T., Rahman S. U., Randhawa A., Ahmed A. and
Akram K. (2012), “Optimization of lactic acid production from cheap raw
material: sugarcane molasses”, Pak. J. Bot., 44(1):Pp.333-338.
[22]. Han B., Yu Z., Liu B., Ma Q. and Zhang R. (2011), “Optimization of bacteriocin
production by Lactobacillus plantarum YJG, isolated from the mucosa of the gut
of healthy chickens”, African Journal of Microbiology Research, Pp. 1147-1155.
[23]. Karlsson C., Ahrne S. and Molin G. ( 2009), “Probiotic therapy to men with
incipient arteriosclerosis initiates increased bacterial diversity in colon: a
randomized controlled trial”, Atherosclerosis
[24]. Kleerebezem M., Boekhorst J., Kranenburg R. V., Molenaar D., Kuipers O. P., Leer R., Tarchini R., Peters S. A., Sandbrink H. M., Fiers M. W. E. J., Stiekema W., Lankhorst R. M. K., Bron P. A., Hoffer S. M., Groot M. N. N., Kerkhoven
R., Vries M., Ursing B., Vos W. M. and Siezen R. J. (2003), “Complete genome
sequence of Lactobacillus plantarum WCFS1”, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A,
100:Pp. 1990-1995.
[25]. Lim H. J., Kim S. Y. and Lee W. K. (2004), “Isolation of cholesterol-lowering
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 66
[26]. Lonnermark E., Friman V. and Lappas G. (2009), “Intake of Lactobacillus plantarum reduces certain gastrointestinal symptoms during treatment with
antibiotics”, J Clin Gastroenterol.
[27]. Marcel D. (2005), “Lactic Acid Bacteria: Microbiological and Functional
Aspects, Third Edition (Food Science and Technology)”, Library of congress
Cataloging-in- publication Data, ISBN 0-203- 02673 X Master e-book ISBN.
[28]. Nagarjun P. A., Rao R. S., Rajesham S. and Rao L. V. (2005), “Optimization of
Lactic Acid Production in SSF by Lactobacillus amylovorus NRRL B-4542
Using Taguchi Methodology”, The Journal of icrobiology, Pp. 38-43.
[29]. Muhamad Nor N., Mohamad R., Ling Foo H. and Rahim R. A. (2010),
Improvement of Folate Biosynthesis by Lactic Acid Bacteria Using Response
Surface Methodology”, Food Technol. Biotechnol, 48(2):Pp. 243ậ250.
[30]. Nissen L., Chingwaru W. and Sgorbati B. (2009 ), “Gut health promoting activity
of new putative probiotic/protective Lactobacillus spp. Strains: a functional study
in the small intestinal cell model”, Int J Food Microbiol, Pp. 288-94.
[31]. Ooi L. G. and Liong M. T. (2010), “Cholesterol-Lowering Effects of Probiotics
and Prebiotics: A Review of in Vivo and in Vitro Findings”, International Journal of Molecular Sciences.
[32]. Plackett R. L. and Burman J. P. (1946), “The Design of Optimum Multifactorial
Experiments”, Biometrika, Pp. 305-325.
[33]. Qin H., Zhang Z. and Hang X. (2009), “L.plantarum prevents enteroinvasive
Escherichia coli-induced tight junction protein changes in intestinal epithelial
cells”, BMC MicrobioJ, Pp. 31;9;63.
[34]. Reichelt J. L. (2013), “The impact of Technical Exellence in Microbiology on the results obtained with Silage Inoculants and Bacterial Biopesticcides”, Bacterial Fermentation Pty Ltd.
[35]. Shahravy A., Tababdeh F., Bambai B., Zamanizadeh H. R. and Mizani M. (2012),
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 67
powder as cacbon source”, Chemical Industry & Chemical Engineering Quarterl,
Pp. 273−282.
[36]. Tanaka H., Doesburg K., Iwasaki T. and Mierau I. (2006), “Bile salt hydrolase
and cholesterol removal effect by Bifidobacterium bifidum NRRL 1976”, World
Journal of Microbiology & Biotechnology.
[37]. Vamanu E. vƠ cs. (2009), “Studies regarding the production of probiotic biomass
from Lactobacillus plantarum strains”, Archiva Zootechnica, Pp. 92-101.
[38]. Vaquero, I., Marcobal, A. and Muñoz, R. (2004), “Tannase activity by lactic acid
bacteria isolated from grape must and wine”, International Journal of Food
Microbiology , 96: Pp. 199-204.
[39]. Waugh A. W. G., Foshaug R., Macfarlane S., Doyle J., Churchili T. A., Sydora B.
C. and Fedorakr R. N. (2009), “Effect of Lactobacillus plantarum 299v treatment
in an animal model of irritable bowel syndrome”, Microbial Ecology in Health
and Disease, Pp. 33-37.
[40]. Ziarno M., Sekul E. and Lafraya A. A. (2007), “Cholesterol assimilation by commercial yoghurt starter cultures”, Acta Sci. Pol., Technol. Aliment, Pp. 83-94.
Tài li u web
[41]. Learn about the Importance of Good Bacteria, Part II: Lactobacillus Plantarum (2010)
http://www.naturalnews.com/027845_probiotics_health.html##ixzz32e0f5rNg
[42].WHO(2013),
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 68 PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: MỌIăTRƯỜNG Thành ph n môi tr ờng MRS: − Peptone 10 g − Cao th t 10 g − Cao n m men 5 g − Glucose 20 g − K2HPO4 2 g − Natri acetate 5 g − MgSO4.7H2O 0,2 g − MnSO4.4H2O 0,2 g − Tween 80 1 mL − (NH4)citrate 2 g −N ớc 1000 mL
Thành ph n môi tr ờng MRSA: giống thành ph n môi tr ờng MRS
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 69 PHỤ LỤC 2: B NG K T QU
B ng 2.1. K t qu x lí th ng kê ANOVA m t y u t kh o sát nhăh ng c a pH, nhi tăđ đ n kh nĕngătĕngătr ng c a L. plantarum NT1.5
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 70 B ng 2.1. K t qu x lí th ng kê ANOVA m t y u t c a các ngu n Nit ă kh o sát
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 71 B ng 2.2.Kk t qu x lí th ng kê ANOVA m t y u t c a các ngu n Cacbon kh o sát
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 72 B ng 2.3. K t qu x lí th ng kê ANOVA m t y u t c a các ngu n mu i khoáng kh o sát
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 73 Đ th 2.1: Đ th nhăh ng chu n hóa
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 74 Đ th 2.2. Pareto c a các y u t nhăh ng
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 75 B ng 2.4 K t qu phân tích h iăquyăph ngăsai cho thí nghi m P-B
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 76 B ng 2.5 K t qu phân tích h i quyăph ngăsaiăc a thí nghi m kh iăđ u.
SVTH: TRẦN THỊ KIỀU 77 B ng 2.6 K t qu phân tích h iăquyăph ngăsaiăc a thí nghi m Box-Behnken