2.1. Vật liệu nghiên cứu
Chồi nuôi cấy: gồm các chồi in vitro của hai giống lan Hồ điệp (Phalaenopsis Yubidan) và lan Dendrobium Sonia 12 tuần tuổi của phịng Cơng nghệ Sinh học - Viện khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Miền Nam, được tạo từ các PLB năm 2008.
Mơi trường ni cấy: Các thí nghiệm sử dụng môi trường MS (Murashige và Skoog, 1962) lỏng, với khoáng đa lượng (NH4NO3, KNO3, Mg2SO4, CaCl2, KH2PO4) được điều chỉnh theo tỉ l 0, ẳ, ẵ v 1. Cỏc mui trung, vi lượng (MnSO4.4H2O, ZnSO4.7H2O, CuSO4.5H2O, KI, CoCl2.6H2O, H3BO3, Na2MoO4.2H2O, Na2.EDTA, FeSO4.7H2O) và các muối hữu cơ và các vitamin (Myo-Inositol, Nicotinic acid, Pyridoxine HCl, Thiamine HCl, Glycine) vẫn giữ nguyên hàm lượng như môi trường MS cơ bản. Các chất bổ sung vào môi trường môi trường nuôi cấy gồm: NAA, BA và Tryptone, đường, Polyvinylpyrolidone (PVP).
Hệ thống nuôi ngập tạm thời TIS (Temporary Immersion System): Hệ thống TIS do hãng RITA của Pháp thiết kế và sản xuất. Hệ thống TIS gồm: 20 RITA- bioreactor, 1 bơm nén khí, 1 lược phân phối khí, 42 van lọc khuẩn (0.2-0.45µm) và 1 Timer điều khiển chu kỳ hoạt động toàn bộ hệ thống.
Thời gian và địa điểm nghiên cứu
Thời gian: đề tài thực hiện từ 04/02/2009 – 14/05/2009
Địa điểm: đề tài thực hiện tại phịng thí nghiệm Mơ - Tế bào Thực vật, thuộc phịng Cơng nghệ Sinh học, Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp miền Nam.
Dụng cụ pha môi trường và khử trùng dụng cụ ni cấy
Cân phân tích có tải cân từ 0.0001g đến 250g.
Máy đo pH để hiệu chỉnh pH môi trường trước khi hấp khử trùng. Pippetmen có dung tích từ 10 – 1000 µl và từ 1 - 10 ml.
Ống đong có dung tích 1000 ml và cốc thủy tinh từ 50 – 3000 ml. Bình định mức 25 ml, 50 ml.
Đũa khuấy thủy tinh, máy khuấy từ. Máy cất nước 1 lần 8 lít/giờ.
Nồi hấp khử trùng (autoclave) dung tích 85 lít và 40 lít. Tủ mát 40C dùng bảo quản hoá chất và dung dịch mẹ. Tủ UV khử trùng bề mặt.
Dụng cụ trong phòng cấy
Tủ cấy đơi, kiểu gió thổi ngang, kích thước lỗ màng lọc 0.2 - 0.3 µm.
Dụng cụ giải phẫu mơ gồm: dao, kéo, kẹp, đèn cồn, giá để dụng giải phẫu. Khay đựng mẫu cấy, giấy lót khử trùng.
2.2. Phương pháp nghiên cứu2.2.1. Cách pha môi trường 2.2.1. Cách pha môi trường