1. Khỏi niờm, phõn loại và ứng dụng của immunotoxin
3.3.4 khảo sỏt nhiệt độ nuụi cấy
Ngoài cỏc yếu tố kể trờn, thỡ yếu tố ảnh hưởng trực tiếp đến khả năng sinh trưởng và biểu hiện độc tố miễn dịch Hermel của chủng đú là nhiệt độ nuụi cấy. Nghiờn cứu khả năng biểu hiện của chủng E. coli BL21 mang
plasmid tỏi tổ hợp pET-21a(+)/HER2 ở cỏc nhiệt độ nuụi cấy khỏc nhau 28oC, 30oC và 37oC trong cựng điều kiện nuụi cấy (như mụ tả trong phần phương phỏp kết hợp với cỏc điều kiện đó lựa chọn được ở trờn).
66 43 35 25 18 34,47 kDa 14
Hỡnh 3.12. Ảnh hưởng của nhiệt độ nuụi cấy đến khả năng biểu hiện protein tỏi tổ hợp Hermel
1-2; 4: lượng protein ở nhiệt độ 28oC, 30oC và 37oC, 3: thang protein chuẩn
Kết quả ở hỡnh 3.12 cho thấy, yếu tố nhiệt độ ảnh hưởng lớn đến khả năng biểu hiện độc tố miễn dịch Hermel của chủng nghiờn cứu. Ở nhiệt độ 28oC và 30oC khụng thấy xuõt hiện băng protein ở kớch thước 34,47 kDa, chứng tỏ độc tố miễn dịch Hermel khụng được tổng hợp ở nhiệt độ nuụi cấy này. Cũn ở nhiệt độ nuụi cấy là 37oC thỡ đó biểu hiện được độc tố miễn dịch Hermel.
3.3.5. Ảnh hƣởng của IPTG
IPTG (isopropyl β - D- thiogalactoside) là chất cảm ứng đối với T7 lac promoter. Promoter này điều khiển trực tiếp quỏ trỡnh biểu hiện gen mó húa độc tố miễn dịch đặc hiệu khỏng nguyờn Her2. Vỡ vậy, IPTG cú tỏc động trực tiếp và rất lớn đến khả năng tổng hợp độc tố miễn dịch Hermel. IPTG cú giỏ thành rất cao nờn việc khảo sỏt cỏc nồng độ IPTG thấp hơn để giảm chi phớ là điều rất cần thiết. Vỡ vậy trong nghiờn cứu này, chỳng tụi đó nghiờn cứu ảnh
hưởng của dải nồng độ IPTG từ 1 – 3 mM. Chủng E. coli BL21 mang plasmid tỏi tổ hợp HER2 được nuụi cấy trong cựng điều kiện (như mụ tả trong phần phương phỏp kết hợp với cỏc điều kiện đó lựa chọn được ở trờn). Cỏc thớ nghiệm này chỉ khỏc nhau ở nồng độ IPTG được sử dụng để cảm ứng là 1 mM, 2 mM và 3 mM. 1 2 3 4 kDa 66 43 35 34,47 kDa 25 18 14
Hỡnh 3.13. Ảnh hưởng của IPTG đến khả năng biểu hiện của độc tố miễn dịch đặc hiệu khỏng nguyờn Her2
1-3: lượng protein được tổng hợp ở nồng độ IPTG 1mM, 2mM và 3 mM. 4: thang protein chuẩn
Kết quả hỡnh 3.13 cho thấy, IPTG cú ảnh hưởng rất lớn đến sự biểu hiện protein tỏi tổ hợp HER. Lượng protein tăng dần với nồng độ IPTG. Ở nồng độ IPTG là 3 mM cho băng protein là đậm nhất hay lượng protein tỏi tổ
hợp được tổng hợp nhiều nhất. Do vậy, đó chọn nồng độ chất cảm ứng IPTG là 3 mM.