CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1.2.2. Phân tích PCBs bằng phương pháp thử nghiệm miễn dịch ELISA.
ELISA là phương pháp kiểm tra nhanh, có thể sử dụng cho phân tích hiện trường. Cơ sở định lượng của phương pháp ELISA dựa trên thử nghiệm miễn dich giữa chất chất kháng nguyên đặc hiệu và chất kháng thể. Đó là sự cạnh tranh của enzim cộng hợp và PCBs trong mẫu. PCBs được cố định trên các giếng microtiter. Trong quá trình thử nghiệm, mẫu và enzim cộng hợp được cho vào giếng trong đó đã có sẵn kháng thể. Thuốc trong mẫu sẽ cạnh tranh với enzim cộng hợp để gắn vào lượng giới hạn kháng thể PCBs có trong giếng. PCBs có phản ứng hóa học với tác nhân màu (3,3’,5,5’- tetramethylbenzidine) và enzim (hydrogen peroxide). Phản ứng ngưng khi ta thêm H2SO4 2M, đo phổ hấp thu ở bước sóng 450nm. Định lượng theo phương trình:
0
log B a lnCA b
B
Trong đó: B là độ hấp thu của mẫu thật ở bước sóng 450nm. B0 là độ hấp thu của mẫu trắng ở bước sóng 450nm.
Các bước tiến hành với độ kit ELISA đơn giản, khâu xử lý mẫu đơn giản, kinh tế, có thể xác định PCBs trong khoảng nồng độ tuyến tính của bộ kit là 0,05 – 5ppm. Tuy nhiên, bộ kit ELISA được dùng cho phép phân tích bán định lượng và thường chỉ dùng để phân tích những nền mẫu phân cực như nước, đất, sữa…
Để phân tích trên nền mẫu không phân cực như mẫu dầu thì người ta xây dựng bộ kit thử nghiệm miễn dịch EIA. Nguyên tắc phương pháp này cũng dựa trên gián tiếp định lượng PCBs qua phản ứng miễn dịch phát triển trên cơ sở của phương pháp ELISA kết hợp thêm các bước tách chiết và làm sạch. Với phương pháp này yêu cầu xử lý mẫu chiết LLE với DMSO, làm sạch với KOH-MeOH sau đó với H2SO4 rồi cho qua cột SPE, rửa giải với Hexan, thổi khô dung môi, sau đó định mức lại dung môi MeOH. Hàm lượng PCBs có thể định lượng bằng phương pháp này nằm trong khoảng 30 – 1.000 ng/mL. Phương pháp này càng nhạy khi số lượng Cl trong phân tử PCBs càng lớn.
Trường ĐH Bà Rịa - Vũng Tàu