3. ỨNG DỤNG CỦA MONASCUS
2.2.3.3.Phân tích chất màu và Monacolin bằng phương pháp
(TLC)
a. Nguyên tắc:
Sắc kí lớp mỏng là một kĩ thuật sắc kí được dùng để tách các chất trong hỗn hợp. Phương pháp sắc kí lớp mỏng bao gồm pha tĩnh là một lớp mỏng các chất hấp phụ thường là silica gel, aluminium oxit hoặc celluloza được phủ trên một mặt phẳng chất trơ. Pha động bao gồm dung dịch cần phân tích được
hoà tan trong một dung môi thích hợp và được hút lên bản sắc kí bởi mao dẫn, tách dung dịch thí nghiệm dựa trên tính phân cực của các thành phần trong dung dịch.
Một vệt nhỏ dung dịch chứa mẫu thử được thấm lên bản sắc kí, khoảng 1cm từ dưới lên. Bản sắc kí sau đó được nhúng vào một dung môi thích hợp và được đặt vào trong một vật chứa có nắp. Dung môi di chuyển lên bản sắc kí bởi mao dẫn, gặp phải mẫu thử và dịch chuyển mẫu thử lên bản sắc kí. Các hợp chất khác nhau trong hỗn hợp mẫu thử dịch chuyển với tốc độ khác nhau do chúng có sức hút khác nhau đối với pha tĩnh và độ tan khác nhau trong dung môi. Các hợp chất được tách ra dựa trên sự cạnh tranh của chất tan và pha động để có được chỗ liên kết với pha tĩnh. Pha tĩnh trì hoãn sự di chuyển của các thành phần trong mẫu. Khi các thành phần này di chuyển qua hệ thống với tốc độ khác nhau, chúng sẽ được tách khỏi nhau theo thời gian. Kết quả là mỗi chất trong hỗn hợp được phân chia thành một vùng riêng biệt, ta thu được một sắc kí đồ trên bản mỏng.
b. Dung dịch chạy:
- Bao gồm: Chloroforme , Methanol, và Benzene. Dung dịch chạy được để trong bình kín tối màu.
c. Tiến hành chạy TLC:
- Sử dụng bản sắc kí nhôm. Bản TLC được sấy ở 105oC trong khoảng 3 phút.
- Nhỏ các giọt mẫu lên các điểm đã đánh dấu trên bản TLC, vừa nhỏ vừa sấy khô giọt mẫu. Mẫu phải được sấy khô mới nhỏ tiếp các giọt mẫu khác.
- Đặt cân bằng bản TLC trong bình sắc kí có chứa dung dịch chạy được pha theo tỷ lệ như trên ở nhiệt độ phòng, để chạy hết bản sắc kí trong khoảng 2 giờ.
- Sau khi đã chạy hết, bản TLC được lấy ra khỏi bình rồi cho vào tủ sấy, sấy ở nhiệt độ 105oC trong 5 phút.
- Sau đó lấy ra rồi nhuộm bản mỏng với hơi iodine hoặc quan sát UV ở bước sóng 254 nm để phát hiện Monacolin.
PHẦN ІІІ. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN