3. ỨNG DỤNG CỦA MONASCUS
2.2.1. Nuôi cấy theo phương pháp bề mặt
- Chuẩn bị nút bông: Rửa sạch các ống thủy tinh, bình tam giác 250ml và 500ml để khô rồi tiến hành làm nút sau đó đem hấp thanh trùng ở nhiệt độ 121ºC trong 15 phút.
- Chuẩn bị môi trường PDA để giữ giống và nhân giống: Ta sử dụng PDA dạng thô (PDA chuẩn của Difco) pha với nước cất theo tỉ lệ 1:2,5 rồi đun sôi qua lưới Amiang cho tan thạch, để nguội sau đó đổ vào mỗi ống nghiệm thủy tinh 12ml môi trường, rồi đem hấp thanh trùng ở 121ºC trong 15 phút, để nguội cho vào tủ lạnh.
- Chuẩn bị môi trường lên men (môi trường lên men ở đây là môi trường rắn trên cơ chất là gạo): Đem gạo không rửa nấu chín theo tỉ lệ cứ 100g gạo khô với 70ml nước, nấu xong để nguội cơm rồi cho vào các bình tam giác 500ml đã thanh trùng tuyệt đối mỗi bình 50g gạo, sau đó đem hấp thanh trùng ở nhiệt độ 121ºC trong 15 phút, rồi cho vào tủ cấy để nguội bật đèn tím chờ cấy giống.
- Lên men: Sau khi giống được nuôi cấy trên môi trường thạch PDA trong thời gian 8 ngày ở nhiệt độ 30ºC bào tử sẽ phát triển kín trên bề mặt thạch và có màu đỏ, ta tiến hành cấy giống bằng hệ sợi hoặc bào tử:
+ Hệ sợi: Dùng que cấy lấy bào tử phát triển trên môi trường thạch, cấy trực tiếp vào môi trường trên ngọn lửa đèn cồn.
+ Bào tử: Trên ngọn lửa đèn cồn ta tiến hành hút 10ml nước cất đã vô trùng vào trong ống thủy tinh chứa giống, rồi dùng que cấy gạt nhẹ những bào tử trên thạch hòa tan vào nước, sau đó dùng pipet5 đã thanh trùng hút 5ml nước cất chứa bào tử đó bơm vào trong môi trường lên men (ở đây là 50g gạo trong bình tam giác 500ml).
Sau khi cấy giống xong ta đưa các bình tam giác 500ml đó vào tủ ấm nuôi tĩnh ở nhiệt độ 30ºC trong thời gian 8 ngày.