Bảng 2: ảnh hởng của kinetin đến sinh trởng, phát triển của chồi cúc CN97 in vitro (sau 4 tuần nuôi cấy)
Công thức Nồng độ kinetin Số chồi ban đầu Số chồi tạo thành Chiều cao chồi (cm) Số mắt ngủ chồi Hệ số nhân nhanh ĐC 0 ppm 240 240 4,20 8,30 4,15 N1 3 ppm 240 334 2,90 7,00 4,48 N2 5 ppm 240 528 3,50 7,50 8,25 N3 7 ppm 240 626 3,29 8,04 10,49 N4 10 ppm 240 269 1,40 6,00 3,36
Kinetin là chất điều tiết sinh trởng có khả năng kích thích sự phát sinh chồi mới và tăng cờng khẳ năng tổng hợp diệp lục của cây, thờng đợc sử dụng trong nhân giống in vitro. Để nghiên cứu ảnh hởng của kinetin lên khả năng nhân chồi cúc CN97, chúng tôi có bổ sung thêm kinetin với nồng độ thay đổi là 3; 5; 7; và 10 ppm vào môi trờng dinh dỡng (MS + 8 g/l agar +30 g/l saccaroza +15% nớc dừa). Kết quả của các thí nghiệm đợc thể hiện ở bảng 2.
Kết quả cho thấy: Trong môi trờng dinh dỡng không bổ sung chất điều tiết sinh trởng, chồi cúc phát triển mạnh về chiều cao nhng không phát sinh chồi mới nên hệ số nhân nhanh thấp (4,15). ở công thức đối chứng, chồi in vitro cao hơn các công thức còn lại (4,2 cm), lá nhiều nhng đờng kính chồi cúc nhỏ, lá xanh nhạt, mỏng, các chồi không đẻ nhánh.
Trong các công thức có bổ sung kinetin, hầu hết các chồi cúc đều đẻ nhánh, sinh chồi.
- Công thức nhân nhanh N1: (Môi trờng dinh dỡng đợc bổ sung 3ppm kinetin, chiều cao của cừôi cúc thấp hơn so với đối chứng (2,9 cm), đờng kính thân chồi lớn hơn nhng không đáng kể. Tuy vậy, ở công thức N1, đã có sự phát sinh chồi in vitro mới, lá cúc mặc dù còn mỏng, xanh nhạt nhng cũng to hơn so với đối chứng; chứng tỏ, bổ sung kinetin vào môi trờng dinh dỡng đã kích thích sự phát sinh chồi mới. Tuy nhiên vai trò sinh lý của kinetin ở nồng độ 3 ppm còn thấp.
- Công thức nhân nhanh N2: Khi nồng độ kinetin trong môi trờng dinh dỡng tăng lên 5 ppm thì sinh trởng, phát triển của chồi cúc đã có sự khác biệt rõ rệt: đờng kính chồi to, lá dày, xanh đậm hơn so với đối chứng, chiều cao chồi tăng (3,5 cm), 100% số chồi đẻ nhánh và hệ số nhân nhanh gần gấp đôi công thức N1 (8,25).
- Công thức nhân nhanh N3: Bổ sung kinetin nồng độ 7 ppm vào môi tr- ờng dinh dỡng, chồi cúc có đờng kính thân lớn, lá dày, màu xanh đậm; phần lớn các chồi đều đẻ nhánh cho 2 – 3 chồi/chồi cấy. Kết quả cho thấy, công thức này đạt hiệu quả tốt nhất, hệ số nhân nhanh đạt 10,49 - cao nhất so với các công thức còn lại. Về mặt hình thái, mặc dù chiều cao chồi in vitro (3,29 cm) có thấp hơn so với công thức nhân nhanh N2 (3,5 cm) nhng số lá trung bình/chồi cấy nhiều hơn (8,04 lá so với 7,5 lá), chồi mập và khoẻ hơn; chứng tỏ nồng độ 7 ppm kinetin có tác dụng tốt trong việc kích thích sinh trởng, phát triển của chồi cúc CN97 in vitro.
- Công thức nhân nhanh N4: Nồng độ 10 ppm kinetin trong môi trờng dinh dỡng đã ức chế khả năng nhân chồi thể hiện bởi: chồi cúc thấp (1,4 cm) - rất ít tăng trởng về chiều cao, đờng kính chồi nhỏ, một số chồi không đẻ nhánh, số lá/chồi ít (trung bình đạt 6 lá/chồi), lá có màu vàng - xanh, chồi yếu, hệ số nhân nhanh thấp hơn so với các công thức khác (3,36). Chứng tỏ, ở nồng độ 10 ppm, kinetin đã có ảnh hởng xấu đến khả năng sinh trởng, phát triển của chồi cúc.
Nh vậy, nếu sử dụng kinetin làm chất kích thích sinh trởng bổ sung cho môi trờng nhân nhanh cúc CN97 thì nồng độ 7 ppm là thích hợp nhất.