Nhiễm vi khuẩn, nấm mốc là khó khăn thờng gặp trong quá trình nhân giống in vitro. các môi trờng nuôi cấy trong mỗi giai đoạn đều yêu cầu phải vô trùng, nếu có sơ suất trong thao tác kỹ thuật, hoặc do điều kiện ngoại cảnh (nhiệt độ, độ ẩm phòng) không đảm bảo, có thể làm cho các bào tử nấm mốc, vi khuẩn rơi vào bình nuôi. Môi trờng dinh dỡng trong bình nuôi sẽ tạo điều kiện cho vi khuẩn, nấm mốc phát triển nhanh chóng, ảnh hởng xấu đến mẫu nuôi cấy.
Kết quả của giai đoạn vào mẫu phụ thuộc vào cách lấy mẫu và thời điểm lấy mẫu. Các cây cúc dùng làm nguyên liệu cho các nghiên cứu của đề tài đợc trồng tại nhà lới nên nếu lấy mẫu trong điều kiện độ ẩm không khí lớn (>80%) hoặc thời tiết quá nóng sẽ làm cho sức sống của mẫu cúc cấy gây giảm nhiều, ảnh hởng xấu đến khả năng bật chồi của mẫu.
Mẫu sử dụng để cấy gây là chồi đỉnh và các chồi bên tơng đối mọng nớc và giòn nên dễ bị gãy dập trong các thao tác xử lý. Lớp lông mịn phủ trên bề mặt mẫu đã làm giảm hiệu quả tác động của hoá chất khử trùng. Cần phải làm sạch lớp lông này trớc khi khử trùng mẫu.
3.6.2. Giai đoạn huấn luyện thích nghi.
Cây ex vitro khi đợc đa từ trong bình nuôi ra môi trờng tự nhiên để huấn luyện thờng có sức đề kháng yếu (do sự thay đổi từ môi trờng in vitro với đầy đủ chất dinh dỡng, nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng ổn định ra điều kiện tự nhiên với nhiều biến động). Vì thế, trong giai đoạn đầu của quá trình huấn luyện, cần tạo ra điều kiện môi trờng huấn luyện với chế độ giữ ẩm và chiếu sáng hợp lý, sau đó từ từ điều chỉnh để cây con có thể thích nghi kịp.
Cây cúc ex vitro là loại cây khó huấn luyện thích nghi ngoài môi trờng tự nhiên, dễ bị đổ gãy và rất nhạy cảm với độ ẩm môi trờng. Nếu môi trờng có độ ẩm cao >80%, cây dễ bị thối rữa; Nếu môi trờng quá khô, cây dễ bị héo và đổ rạp, vì thế phải đảm bảo chặt chẽ việc che chắn và chăm sóc. Khi tới nớc, nhất thiết phải phun nớc dới dạng sơng mù để tránh làm cây con bị đổ.
Kết luận và đề nghị A. Kết luận
Từ những kết quả nghiên cứu, chúng tôi xây dựng quy trình kỹ thuật in vitro trong nhân giống cúc CN97 nh sau: