Các đoạn thân mang mắt ngủ hoặc đỉnh sinh trởng của các cây cúc giống đợc khử trùng bằng HgCl2 0,1% trong 10 phút sau khi xử lý sơ bộ bằng etanol 700 trong 30 giây. Môi trờng dinh dỡng đợc sử dụng để vào mẫu, cấy gây là: (MS + 8 g/l agar +30 g/l saccaroza +1 ppm BAP + 0,2 ppm α-NAA + 10% nớc dừa).
Thời gian cấy gây là 4 tuần.
2. Giai đoạn nhân nhanh.
Môi trờng sử dụng để nhân nhanh chồi cúc CN97 in vitro là:
(MS + 8 g/l agar +30 g/l saccaroza + 15% nớc dừa +7 ppm kinetin). Thời gian nhân nhanh là 4 tuần.
3. Giai đoạn ra rễ, tạo cây hoàn chỉnh.
Môi trờng thích hợp cho chồi cúc in vitro ra rễ là:
(MS + 8 g/l agar +30 g/l saccaroza +10% nớc dừa + 0,50 g/l than hoạt tính + 0,5 ppm α- NAA)
Thời gian ra rễ, tạo cây hoàn chỉnh là 4 tuần.
Trong 3 giai đoạn nuôi cấy ở phòng thí nghiệm: vào mẫu cấy gây, nhân nhanh, ra rễ tạo cây hoàn chỉnh, các chồi cúc in vitro đợc nuôi cấy trong điều kiện: nhiệt độ 25 2± 0C, độ ẩm 65 - 70 %, cờng độ ánh sáng 2000 - 2500 lux, và thời gian chiếu sáng là 12h / ngày.
4. Giai đoạn huấn luyện thích nghi.
Giá thể thích hợp nhất để huấn luyện cây cúc CN97 ex vitro là đất thịt nghiền mịn.
Điều kiện huấn luyện là: độ ẩm không khí 80 - 85%, độ ẩm giá thể 65 - 80%, nhiệt độ 25 2± 0C, nguồn khoáng bổ sung là dung dịch dinh dỡng MS phun lên lá dới dạng sơng mù.
Thời gian của giai đoạn này là 4 tuần.
B. Đề nghị
1. Đề tài cần đợc nghiên cứu mở rộng để đánh giá vai trò của các hoá chất khử trùng khác đối với khả năng sống và bật chồi của giống cúc CN97.
2. Nghiên cứu phối hợp vai trò sinh lý của BAP và kinetin đối với quá trình nhân giống.
Tài liệu tham khảo A. Tài liệu tiếng Việt:
1. Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Quang Thạch. Nghiên cứu các phơng
pháp nhân nhanh một số giống cúc chùm Hà Lan. Báo cáo khoa học
hội nghị CNSH toàn quốc, NXB Khoa học và Kỹ thuật, 1999, trang 859. 2. Ban khoa giáo Trung ơng và Bộ Khoa học và Công nghệ. Tài liệu
Hội nghị quán triệt Chỉ thị số 50 CT/TW của Ban Bí th– TW Đảng và triển khai hành động của Chính phủ về việc đẩy mạnh phát triển và ứng dụng công nghệ sinh học phục vụ sự nghiệp công nghiệp hoá, hiện đại hoá đất nớc, (Tài liệu hội nghị), Hà Nội, tháng 9 năm 2005.
3. Đào Thanh Bằng và nnk. Kết quả chọn giống cúc bằng phơng pháp chiếu xạ in vitro. Báo cáo hội nghị Những nghiên cứu cơ bản trong khoa học sự sống. NXB Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội, 2005, trang 386 – 389.
4. Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội. Công nghệ sinh học thực vật trong cải tiến giống cây trồng. NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 1997.
5. Lê Hữu Cẩn, Nguyễn Xuân Linh. Giáo trình hoa, cây cảnh. NXB Nông nghiệp, Hà Nội, 2003, trang 81 – 95.
6. Võ văn Chi, Dơng Đức Tiến. Phân loại thực vật học, Thực vật bậc