Từ ựồ thị 4.12 chúng ta thấy enzyme chitosanase ổn ựịnh trong khoảng pH từ 4-8 và nhiệt ựộ 45-60oC. Khoảng pH ổn ựịnh này tương tự với enzyme thu từ Bacillus cereus TP 12.24 (pH 3-8), Streptomyces cyaneogriseus (pH 5-8), Aspergillus fumigatus KB-1 (pH 3,5-8,5) [36,13,37]. Khoảng nhiệt ựộ (45-55oC) cũng là khoảng nhiệt ựộ mà chitosanase từ Gongronella sp. JG và
Streptomyces aureocirculatus khá ổn ựịnh [39,12].
4.3.4. Ảnh hưởng của một số ion kim loại tới hoạt tắnh của enzyme chitosanase chitosanase
Các ion kim loại cũng và yếu tố ảnh hưởng lớn tới hoạt tắnh của enzyme. Xác ựịnh hoạt tắnh tương ựối của enzyme khi có mặt của một số ion kim loại ở nồng ựộ 1mM và 10 mM, hoạt tắnh của enzyme khi không có mặt của các ion kim loại là 100%. Kết quả ựược thể hiện trong bảng 4.8
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 58
Bảng 4.10 Ảnh hưởng của các ion kim loại tới hoạt tắnh của enzyme chitosanase 1mM 10mM Cu2+ 121,9 28,2 Mg2+ 121,3 102,4 Al3+ 73,9 11,.7 Fe3+ 17.2 79,0 Zn2+ 2,0 19,5 Li2+ 149,8 61,6 Pb2+ 66,8 141,9 K+ 127,5 61,4 Fe2+ 4,2 10,8 Ca2+ 56,8 55,8 đối chứng 100,0 100,0
Từ kết quả trên cho thấy các ion kim loại Fe3+, Fe2+, Zn2+, Ca2+ làm bất hoạt enzyme ở cả 2 nồng ựộ, trong khi ựó các ion Li2+, K+, Cu2+ lại kắch thắch hoạt ựộng của enzyme ở nồng ựộ thấp 1mM nhưng ở nồng ựộ 10mM lại kìm hãm sự hoạt ựộng của enzyme. điều này lại diễn ra ngược lại với các ion Al3+, Pb 2+, Mg2+ kắch thắch hoạt ựộng của enzyme ở nồng ựộ 1mM và không ảnh hưởng ựáng kể tới hoạt ựộng của enzyme ở nồng ựộ 10mM.
Sự tác ựộng của Cu tới tắnh ổn ựịnh của chitosanase tương tự như kết quả của W.Zhou et al (2008) với chitosanase thu nhận từ Gongronella
sp.JG. Ở nồng ựộ 10mM chitosanase từ Bacillus sp. 16 cũng bị bất hoạt ựáng kể [46]. Zn cũng gây bất hoạt chitosanase thu nhận từ Gongronella sp.JG,
Bacillus circulans MH-K1, Acinobacter sp. strain CHB101 [39, 20]. Sự kìm
hãm hoạt ựộng của Fe3+, Fe2+ tới chitosanase ở nồng ựộ 1mM cũng ựược Tae Kyuong Eorn và Kang Man Lee khẳng ựịnh trên chitosanase thu ựược từ
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 59
PHẦN NĂM: KẾT LUẬN VÀ đỀ NGHỊ 5.1. Kết luận
Trên cơ sở các kết quả thu ựược chúng tôi ựi ựến một số kết luận sau: 1. đã xác ựịnh ựược các ựiều kiện nuôi cấy tối ưu cho vi khuẩn Bacillus
licheniformis NN1 sinh tổng hợp chitosanase cao:
+ Nhiệt ựộ nuôi cấy là: 36,20C + pH môi trường nuôi cấy là: 7,08 + Nồng ựộ chitosan: 0,2%
2. đã lựa chọn ựược ựiều kiện thu nhận và tinh chế chế phẩm enzyme chitosanase có ựộ sạch cao:
- Làm sạch sơ bộ bằng tủa muối amoni sunphate phân ựoạn 30-80% - Phân chia bằng phương pháp sắc ký trao ựổi ion
- Hoạt tắnh riêng của enzyme chitosanase sau quá trình làm sạch là 2.822 U/m - Khối lượng phân tử của chitosanase là khoảng 75 kDa xác ựịnh bằng ựiện di SDS-PAGE.
3. Xác ựịnh ựược một số tắnh chất của enzyme:
- Nhiệt ựộ và pH tối ưu cho enzyme hoạt ựộng là 45oC và pH=5
- Enzyme chitosanase ổn ựịnh trong khoảng pH 4-8 và nhiệt ựộ 45-60oC - Một số ion kim loại ảnh hưởng lớn tới sự ổn ựịnh của chitosanase: Các ion Fe3+, Fe2+, Zn2+, Ca2+ làm bất hoạt enzyme, các ion Al3+, Pb2+, Mg2+ kắch thắch hoạt ựộng của enzyme.
5.2. đề nghị
- Nghiên cứu nuôi cấy và thu nhận trên quy mô lớn.
- Nghiên cứu hoàn thiện hơn quy trình thu nhận ựể nâng cao hiệu quả thu hồi của enzyme.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 60
TÀI LIỆU THAM KHẢO
TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT
1. Cao Minh Hậu (2006), ỘNhững ứng dụng mới của chất xơ trong thực phẩm: chất bổ sung vào sản phẩm hải sảnỢ. Tạp chắ Khoa học- Công nghệ thủy sản, 2.
2. đặng Thị Thu, Lê Ngọc Tú, PGS. TS Phạm Thu Thủy, Nguyễn Xuân Sâm
(2004), Công nghệ Enzyme, NXB Khoa học và Kĩ thuật, Hà Nội. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3. Ngô Xuân Mạnh, Nguyễn Thị Phương Nhung (2010), " Lựa chọn ựiều kiện tối ưu ựể sản xuất chitosanase từ Streptomyces Griseus (Chủng NN2)". Tạp chắ
Khoa học và Phát triển, đại học Nông nghiệp Hà Nội, 7 (6), 708-787.
4. Nguyễn Văn Mùi (2001), Thực hành hóa sinh học, NXB Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội.
5. Phạm Ngọc Thùy (2008), ỘBước ựầu nghiên cứu thu nhận chế phẩm enzyme
chitosanase ký thuật từ Streptomyces griseusỢ. Tạp chắ khoa học - Công nghệ thủy sản, 03.
6. Phạm Thị Chân Châu, PGS. TS Phan Tuấn Nghĩa (2007), Công nghệ sinh học, NXB Giáo dục.
7. Trần Anh Tuấn, Phạm Văn Cường (2008), ỘẢnh hưởng của chitosan ựến sinh trưởng và năng suất của lúa giống trong ựiều kiện bón ựạm thấpỢ. Tạp chắ
Khoa học và phát triển, VI (5), 415-417.
8. Trần Thái Hòa (2005), ỘNghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng tới quá trình deacetyl hóa và cắt mạch chitin ựể ựiều chế glucosamineỢ.Tạp chắ khoa học, đại
học Huế, 47.
9. Trần Thái Hòa (2005), ỘNghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng tới quá trình deacetyl hóa và cắt mạch chitin ựể ựiều chế glucosamineỢ.Tạp chắ khoa học, đại
học Huế, 47.
TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI
10. A. Pelletier and J. Sygusch (1990), " Purification and Characterization of three chitosanse activities from Bacillus megaterium P1". Applied and
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 61
11. Chasanah Ekowati, Purwiyatno Hariyadi, Arief B. Witarto, Jae Kwan Hwang and Maggy Thenawidjaja Suhartono (2009), "Biochemical Characteristics of Chitosanase From the Indonesian Bacillus licheniformis MB-2". Molecular
biotechnology, vol 33, 93-101.
12. El-S. A. El-Shirbiny; I.M. El-Azouni; M. F. Ghaly and E. Ghaly and E. Abdel-Hamid (2007), " Optimization and characterization purified chitosanase enzyme from Streptomyces Aureocirculatus". Proceeding of the second scientfic
enviromental conffer, Zagazig Uni, 9-22.
13. El-Sayed Ali El-Sherbiny (2011), "Purification and Characterization of Chitosanase Enzyme from Streptomyces cyaneigriseus". Asian Journal of
Biological Sciences, ISSN 1996-3351.
14. F. A. T. Piza, A. P. Siloto, C. V. Caravalho, T.T. Franco (1999). ỘProduction, characterization and purification of chitosanase from Bacillus cereusỢ.
Braz. J. Chem. Eng, 16 (2).
15. H. Barreteau et al.(2006),Ợ Oligosaccharides as Food AdditivesỢ. Food
Technol. Biotechnol, 44 (3), 323Ờ333.
16. Hermann Sch.&Gger and Gebhard Von Jagow (1987). "Tricine-Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis for the Separation of Proteins in the Range from 1 to 100 kDa". Analytical Biochemistry, 166, 368-379.
17. Ho Sup Jung, Jeong Woo Son, Hong Seok Ji, and Wang Kim (1999), Ộ Effective production of chitosanase and chitinase by Streptomyces griseus HUT 6037 using colloidal chitin and various degrees of deacetylation of chitosanỢ.
Biotechnol. Bioprocess Eng, 4, 26-31.
18. Ho-Geun Yoon, Hee-Yun Kim, Hye-Kyung Kim, Bum-Shik Hong, Dong-Hoon
Shin, and Hong-Yun Cho (2001), Ộ Thermostable Chitosanase from Bacillus sp. Strain CK4: Its purification, characterization, and reaction patternsỢ. Biosci. Biotechnol. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Biochem., 65 (4), 802-809.
19. Immaculada Aranaz (2009), "Functional Characterization of chitin and chitosan, Current Chemical Biology, 3, 203-230.
20. J.K. Park, K. Shimono, N. Nobuhisa, K. Shigeru, M. Kurita, Y. Ohta, K. Tanaka, H. Matsuda, and M. Kawamukai ( 1999), ỘPurification, Characterization, and Gene
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 62
Analysis of a Chitosanase (ChoA) from Matsuebacter chitosanotabidus 3001Ợ.
Journal of Bacteriology,181 (21), 6642-6649.
21. Jiali Zhang, Wenshui Xia, Ping Liu, Qinyuan Cheng, Talba Tahirou, Wenxiu Gu, Bo Li (2010), "Chitosan Modification andharmaceutical/Biomedical Applications". Marine Drugs, 8, 1962-1987
22. Jung, W. K., Moon, S. H., and Kim, S. K. (2006), "Effect of chitooligosaccharide on calcium bioavailability and bone strength in ovariectomized rats". Life Sciences, 78:970Ờ976.
23. K.V. Harish Prashanth and R. N. Tharanathan (2007), "Chitin/chitosan: modifications and their unlimited application potential - an overview". Food Science & Techonology, 18, 117 - 131.
24. L. RamıƠrez-CoutinỊo et al (2006), Ộ Enzymatic hydrolysis of chitin in the production of oligosaccharides using Lecanicillium fungicola chitinasesỢ. Process
Biochemistry, 41, 1106Ờ1110.
25. Lin CW, Lin JC (2003), ỘCharacterization and blood coagulation evaluation of the water-soluble chitooligosaccharides prepared by a facile fractionation methodỢ. Biomacromol , 4, 1691-1697.
26. M. Nogawa, H. Takahasi, A. Kashiwagi, K. Ohshima, H. Okada, and Y. Morikawa (1998), ỘPurification and Characterization of Exo-b-D-Glucosaminidase from a Cellulolytic Fungus, Trichoderma reesei PC-3-7Ợ. Applied and environmental
microbiology , 64 (3), 890-895.
27. M. Shimosaka, M. Nogawa, X.Y. Wang, M. Kumehara, and M. Okazaki (1995), ỘProduction of Two Chitosanases from a Chitosan-Assimilating Bacterium,
Acinetobacter sp. Strain CHB101Ợ.Applied and Environmental Microbiology, 61 (2),
438-442.
28. M. Shimosaka, Y. Fukumori, X.-Y. Zhang, N.-J. He, R.Kodaira. M, Okadaki (2000). " Molecular cloning and characterization of chitosanse from the chitosanolytic bacterium Burkholderia gladioli strain CHB101". Appl Microbiol Biotechnol, 54, 354- 360.
29. M. Yabuki, A. Uchiyama, K. Suzuki (1999). ỘPurification and properties of chitosanase from Bacillus circulands MH-K1Ợ. Biosci. Biochem., 21, 246-248.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 63
30. Mei Ming (2006). Production of Physiologically Active Chitosan
Oligosaccharides at High Concentration by Immobilized Chitosanase. University of
Tsukuba, Japan.
31. Ministry of Heath, Labour and Walfare of Japan (2002), Food for Specified
Heath Use's in Japan, Functinal Food.
32. Pelletier and J.Sygusch (1990). ỘPuification and chacracterization of three chitosanase activities from Baccilus megaterim P1Ợ. Applied and environmental
microbiology , 54 (4), 844 - 848.
33. Shadia M. Abdel-Aziz, Yomna A. Mostafa and Foukia E. Moafi, Partial Purification and Some Properties of the Chitosanases Produced by Bacillus Alvei Nrc-14 (2008). Journal
of Applied Sciences Research, 4(10): 1285-1290.
34. Snoke J.E. and Cornell N (1965), "Protoplast Lysis and Inhibition of Growth of Bacillus licheniformis by Bacitracin". J Bacteriol, 89(2), 415Ờ420. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
35. Sun-Ok Fernandez-KimB.S. (2004). Physicochemical and functional
properties of crawfish chitosan as affected by different processing protocols. Seoul
National University.
36. Sutee Wangtueai, Wanchai Worawattanamateekul, Mathana Sangjindavong, Nuanphan Naranong and Sarote Sirisansaneeyakul (2007). ỘProduction and partial Characterization from a newly isolated Bacillus cereusỢ. Nat. Sci, 41, 346-355. 37. Tae Kyoung Eom and Kang Man Lee (2003), ỘCharacteristics of Chitosanases from Aspergillus fumigatus KB-1Ợ.Arch Pharm Res , 26 (12), 1036- 1041.
38. Veith, B., Herzberg, C., Steckel, S., Feesche, J., Maurer, K. H., Ehrenreich, P., Bảumer, S., Henne, A., Liesegang, H., Merkl, R., Ehrenreich, A., Gottschalk, G. (2004), "The complete genome sequence of Bacillus licheniformis DSM13, an organism with great industrial potential". J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 7(4):204- 211.
39. W. Zhou, H. Yuan, J. Wang and J. Yao (2008), ỘProduction, purification and characterization of chitosanase produced by Gongronella sp. JGỢ. Letters in Applied
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 64
40. Wenshui Xia et al (2010), "Biological activities of chitosan and chitooligosaccharides". Food Hydrocolloids , 1-10.
41. Woo-Jin Jung, Ju-Hee Kuk, Yu-Lan Jin and Ro-Dong Park (2005), " Purification and properties of chitoanase fron Bacillus cereus P16". Journal of
Metals, Minerials and Minerials. 15 (1), 27-32.
42. Xiao-E Chen, Xu-Bo Fang and Wen-Sui Xia (2008), ỘStrain improvement and optimization of the mediacomposition of chitosanase-producing fungus
Aspergillus sp.CJ 22-326Ợ. African Journal of Biotechnology ,7 (14), 2501-2508.
43. Xu-fen Zhu,Ying Zhou, Jun-li Feng (2007). ỘAnalysis of both chitinase and chitosanase produced by Sphingomonas sp. CJ-5Ợ. J. Zhejiang Univ Sci B.
November, 8(11): 831Ờ838.
44. Y Wang, P Zhou, J Yu, X Pan, W Lan and S Tao (2007), ỘAntimicrobial effect of Chitooligosaccharides Produced by Chitosanase from Pseudomonas CUY8Ợ. Asia Pac J
Clin Nutr, 16 (Suppl 1), 174-177.
45. Y. J. Choi, E. J. Kim, Z. Piao (2004). ỘPurification and Characterization of Chitosanase from Bacillus sp. Strain KCTC 0377BP and Its Application for the Production of Chitosan OligosaccharidesỢ. Applied and environmental microbiology, 70 (8), 4522Ờ4531.
46. Y.Y. Jo, K.J. Jo, Y.L. Jin, J.H. Jim, Y.W. Kim, and R.Y. Park (2003), Ộ Characterization and Kinetics of 45 kDa chitosanase from Bacillus sp. P16Ợ. Biosci.
Biotechnol. Biochem., 67 (9), 1875-1882.
47. Yasushi Uchida, Koji Tateishi, Kenichi Yamagushi and Hidenori Takeda (1994), "Purification and Characterization of Chitosanase produced by Bacillus
licheniformis UTK". Bull.Fac.Agr., Saga Univ , 77, 53-63.
48. Yu-Wei Lin, Yi-Chien Hsiao, Been-Huang Chiang (2009), "Production of high degree polymerized chitoolygosaccharides in membrane reactor using purified chitosanase from Bacillus cereus". Food research International, 42, 1355-1361. 49. Yuying Sun, J. Zhang, S. Wang (2009), ỘPurification and Characterization of Chitosanase from Aeromonas sp. HG08". African Journal of Biotechnology, 8 (12), 2830-2834.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 65
TÀI LIỆU TRÊN MẠNG
50. Chất giáp xác Tianshi. http://tianshi.hcm.googlepages.com/giapxac, truy cập ngày 12/04/2010.
51. Chitosan oligochacharide. http://oligopharm.ru/Pages-view-106.html. truy cập ngày 20/03/2009.
52. Chitosanases: Cleavage specificity
http://pages.usherbrooke.ca/rbrzezinski/cleavage.htm, truy cập ngày 10/04/2010.
53. Chitosanases: Molecular sequence data.
http://pages.usherbrooke.ca/rbrzezinski/general1.htm, truy cập ngày 15/04/2010. 54. http://www.microbiologynews.info/blog/bacillus-licheniformis/, truy cập ngày 20/09/2011 55. Mechanism of catalysis. http://pages.usherbrooke.ca/rbrzezinski/catalysis.htm, truy cập ngày 15/04/2010. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
56. Một số thuốc BVTV nguồn gốc sinh học thế hệ mới.
http://snnptnt.thanhhoa.gov.vn/SNNPTNT/default.aspx?NewsID=160, truy cập ngày 20/04/2009.
57. Những ựặc ựiểm của chitin, chitosan và dẫn xuất của chúng.
http://www.hoahocvietnam.com/Home/Moi-tuan-mot-hoa-chat/Nhung-dac-diem- cua-Chitin-Chitosan-va-dan-1.html, truy cập ngày 20/03/2009
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 66
PHỤ LỤC
đường chuẩn Glucosamine
y = 3.167x - 0.1848 R2 = 0.999 0 0.5 1 1.5 2 2.5 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 Nồng ựộ (m g/m l) A 5 4 0
đường chuẩn protein
y = 3.3736x R2 = 0.999 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 nồng ựộ (mg/ml) A 5 9 5
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 67
Kết quả chạy mô hình thực nghiệm trên chương trình Memrodw
Fichier RTF généré par le logiciel NEMRODW le : 27/09/2011 Nom de lỖétude créée le 27/09/2011 : nhung
Titre de lỖétude
Qui hoach
Plan dỖexpérimentation
NồExp Rand Nhiet do pH Nong do
chitosan oC pH % 1 49.0 7.00 0.20 2 25.0 7.00 0.20 3 43.0 7.87 0.20 4 31.0 6.13 0.20 5 43.0 6.13 0.20 6 31.0 7.87 0.20 7 43.0 7.29 0.28 8 31.0 6.71 0.12 9 43.0 6.71 0.12 10 37.0 7.58 0.12 11 31.0 7.29 0.28 12 37.0 6.42 0.28 13 37.0 7.00 0.20 14 37.0 7.00 0.20 15 37.0 7.00 0.20
Analyse de la variance : réponse Y1 : Hoat luc enzym
Source de variation Somme des carrés Degrés de liberté
Carré moyen Rapport Signif Régression 2.73637E-0003 9 3.04041E-0004
912.1239
0.0975 *** Résidus 1.46772E-0003 5 2.93544E-0004
Validité 1.46705E-0003 3 4.89018E-0004 1467.0550 0.0600 *** Erreur 6.66667E-0007 2 3.33333E-0007
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 68
Estimations et statistiques des coefficients : réponse Y1 : Hoat luc enzym
Ecart Type de la réponse 0.00058
R2 0.651
R2A 0.022 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
R2 pred N.D.
PRESS 0.015
Nombre de degrés de liberté 2
Nom Coefficient F.Inflation Ecart-Type t.exp. Signif. % b0 0.06923 0.00033 207.70 < 0.01 *** b1 -0.01064 1.00 0.00029 -36.85 0.0493 *** b2 0.00301 1.00 0.00029 10.42 0.649 ** b3 0.00190 1.00 0.00029 6.58 1.89 * b11 -0.02238 1.19 0.00053 -42.47 0.0395 *** b22 -0.03345 1.19 0.00053 -63.47 0.0227 *** b33 -0.01541 1.20 0.00050 -30.83 0.0667 *** b12 -0.00924 1.11 0.00067 -13.86 0.337 ** b13 0.03101 1.11 0.00075 41.60 0.0407 *** b23 -0.00572 1.11 0.00075 -7.67 1.32 *
Tableau des résidus : réponse Y1 : Hoat luc enzym
NồExp Yexp. Ycalc. Différence Normée dU 1 0.03480 0.03621 -0.00141 -2.447 0.750 2 0.05890 0.05749 0.00141 2.447 0.750 3 0.03910 0.03184 0.00726 12.581 0.750 4 0.03000 0.03726 -0.00726 -12.581 0.750 5 0.02320 0.03463 -0.01143 -19.790 0.750 6 0.06190 0.05047 0.01143 19.790 0.750 7 0.05180 0.05765 -0.00585 -10.132 0.750 8 0.06930 0.06345 0.00585 10.132 0.750 9 0.04300 0.03016 0.01284 22.235 0.750 10 0.03200 0.05069 -0.01869 -32.367 0.750 11 0.03280 0.04564 -0.01284 -22.235 0.750 12 0.06900 0.05031 0.01869 32.367 0.750 13 0.06890 0.06923 -0.00033 -0.577 0.333 14 0.06990 0.06923 0.00067 1.155 0.333 15 0.06890 0.06923 -0.00033 -0.577 0.333
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 69
Coordonnées du maximum
Variable Valeur Facteur Valeur
X1 -0.065350 Nhiet do 36.2
X2 0.080023 pH 7.08