3.1. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
đề tài Ộ Tình hình Hội chứng rối loạn hô hấp và sinh sản ở lợn nuôi tại huyện Gia Lâm - Hà Nội và theo dõi một số chỉ tiêu sinh sản của ựàn lợn nái sau dịchỢ ựược tiến hành với các nội dung sau ựây:
3.1.1. Tình hình HCRLHH & SS ở ựàn lợn nuôi tại huyện Gia Lâm Ờ Hà Nội năm 2010 Nội năm 2010
- Tổng hợp tình hình chung HCRLHH & SS ở ựàn lợn nuôi tại huyện
Gia Lâm Ờ Hà Nội.
- Tình hình HCRLHH & SS ở ựàn lợn nái. - Tình hình HCRLHH & SS ở ựàn lợn thịt.
- Tình hình HCRLHH & SS ở ựàn lợn con theo mẹ. - Giám ựịnh virus gây HCRLHH & SS ở lợn.
3.1.2. Theo dõi một số triệu chứng lâm sàng HCRLHH & SS ở ựàn lợn nuôi tại huyện Gia Lâm Ờ Hà Nội năm 2010
Triệu chứng lâm sàng: - Ở lợn nái
- Ở lợn thịt
- Ở lợn con theo mẹ
3.1.3. Một số chỉ tiêu sinh sản ở những lợn nái trong ựàn xảy ra CRLHH & SS ựược giữ lại nuôi ựể sản xuất con giống & SS ựược giữ lại nuôi ựể sản xuất con giống
Thời gian ựộng dục lại của:
- nái hậu bị - nái mang thai
- nái nuôi con
Số lần phối giống và tỷ lệ thụ thai của: - nái hậu bị
- nái mang thai - nái nuôi con
- nái tách con chờ phối
Khả năng sinh sản và chất lượng ựàn con: - Số con theo dõi,
- Số con ựẻ ra/lứa - Số con ựể nuôi
- Số con nuôi ựến cai sữa - Trọng lượng sơ sinh/ con
Tổng hợp kết quả ựiều tra về tình trạng sinh sản của những nái trong ựàn xảy ra HCRLHH & SS ựược giữ lại nuôi ựể sản xuất con giống.
3.1.4. Các biện pháp phòng chống dịch tại huyện Gia Lâm Ờ Hà Nội năm 2010 năm 2010
3.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2.1. Nghiên cứu tình hình HCRLHH & SS ở lợn
Trên cơ sở tài liệu lưu trữ tại Trạm thú y Gia Lâm (Báo cáo về diễn biến tình hình dịch hàng ngày của các xã trên ựịa bàn huyện trong quá trình xảy ra HCRLHH & SS ở lợn), bằng các nghiên cứu dịch tễ học tiến hành phân tắch ựể làm rõ:
- Tổng hợp chung tỷ lệ lợn ốm, tỷ lệ chết chung của một số xã và của từng ựối tượng nghiên cứu (Lợn nái, lợn thịt, lợn con theo mẹ).
Công thức tắnh toán:
Số lợn ốm
Tỷ lệ ốm (%) = x 100
Số lợn chết
Tỷ lệ chết (%) = x 100
Tổng ựàn lợn trong thời gian xảy ra dịch
3.2.2. Theo dõi một số triệu chứng, bệnh tắch HCRLHH & SS ở ựàn lợn
Chúng tôi tiến hành quan sát tất cả những biểu hiện bên ngoài của lợn bệnh và ghi chép cẩn thận, chi tiết.
3.2.2. Theo dõi một số chỉ tiêu sinh sản ở ựàn lợn nái sau dịch
Giám sát trực tiếp tại cơ sở chăn nuôi; thu thập thông tin từ sổ sách ghi chép kết quả phối giống, tình trạng sinh sản của từng nái tại từng hộ gia ựình phân tắch, làm rõ ảnh hưởng của HCRLHH & SS ựến một số chỉ tiêu sinh sản của nái hậu bị, nái mang thai, nái nuôi con và nái tách con chờ phối trong ựàn xảy ra HCRLHH & SS ựược giữ lại nuôi ựể sản xuất con giống.
3.2.3. Giám ựịnh virut gây PRRS bằng phương pháp RT Ờ PCR (Quy trình chẩn ựoán PRRS, Trung tâm chẩn ựoán thú y TW, 2010) trình chẩn ựoán PRRS, Trung tâm chẩn ựoán thú y TW, 2010)
- Phạm vi áp dụng: Quy trình ựược áp dụng ựể xét nghiệm phát hiện virus PRRS tại các phòng xét nghiệm chẩn ựoán bệnh ựộng vật thuộc Cục thú y.
Bệnh phẩm: Huyễn dịch bệnh phẩm, huyết thanh hoặc dịch nổi tế bào sau khi phân lập virus.
Máy móc và nguyên liệu: - Hệ thống chiết tách ARN - Máy Realtime PCA - Bộ Micropipet các cỡ
- Kit chiết tách ARN ( Qiagen hoặc Ambion Magmax)
- Kit RT Ờ PCA: Qiagen one step RT Ờ PCA kit ( Cat No. 210210) hoặc Invitrogen supercript III qRT Ờ PCA kit ( Cat No. 12574-026).
- Prime và probe
* Cách tiến hành
- Chiết tách ARN: áp dụng theo quy trình của nhà sản xuất
+ Chuẩn bị master mix
Qiagen one-step RT Ờ PCA kit Invitrogen SS3 qRT Ờ PCA kit Reagent Lượng (ộl) Reagent Lượng (ộl)
DW 10.5 DW 4.5
5x Reaction Mix 5.0 5x Reaction Mix 12.5
MgCl2 ( 25mM) 1.2 MgCl2 ( 25mM) 1.0
dNTP 0.8
PPP 1.5 PPP 1.5
Enzyme Mix 1.0 Enzyme Mix 0.5
- Cho 20 ộl master mix vào ống PCR - Cho 5 ộl mẫu ARN vào ống PCR - đặt ống PCR vào máy Realtime PCR - Chạy chương trình
- chọn ựọc màu ở bước kéo dài + Chạy phản ứng.
Qiagen one-step Reagent Invitrogen SS3 Reagent
RT PCR RT PCR
500C Ờ 30m 500C Ờ 30m
950C Ờ 15m 950C Ờ 2m
* đọc kết quả:
Xét nghiệm ựược công nhận khi:
- đối chứng dương tắnh cho giá trị Ct ựã biết (ổ2) - đối chứng âm tắnh không có Ct
- Mẫu ựược coi là dương tắnh khi có Ct ≤ 35 - Mẫu ựược coi là âm tắnh nếu không có Ct - Mẫu ựược coi là nghi ngờ nếu Ct ≥ 35
Danh mục và trình tự primer và probe Tên Primer/
probe Sequence ( 5
Ỗ Ờ 3Ỗ) Modofication 5Ỗ 3Ỗ
Probe TGT GGT GAA TGG CAC TGA TTA ACA FAM BHQ1
Forward ATG ATG RGC TGG CAT TCT None None
PRRS-1 ( NA)
Reverse ACA CGG TGG CCC TAA TTG None None
Probe CCT CTG CTT GCA ATC GAT CCA GAC FAM BHQ1
Forward GCA CCA CCT CAC CCA GAC None None
PRRS-2 ( EU)
Reverse CAG TTC CTG CGC CTT GAT None None
Probe CGCGTAGAACTG
TGACAACAACGCTGA
HEX BHQ1
Forward CCCAAGCTGATGACACCTTTG None None
PRRS- China ( JVM)
Reverse AATCCAGAGGCTCATCCTGGT None None
Ớ Phương pháp xử lý số liệu
Sau khi thu thập số liệu, xử lý bằng phương pháp thống kê sinh học thông qua phần mềm Excel trên máy vi tắnh.