Mẫu huyết thanh sau khi qua lọc 0.45ộm, ựược gây nhiễm trên tế bào Marc145. Việc phân lập thường ựược tiến hành khi thảm tế bào ựã bám ựáy 100% trên chai T25 hoặc ựĩa 6-24 giếng [12,32,37,45]. Khác với các loại vi rút khác, khi phân lập vi rút PRRS cần bổ sung thêm 5% huyết thanh bào thai bê vào môi trường nuôi cấỵ Sau ựó Nuôi trong tủ ấm 370C, 3%CO2
theo dõi bệnh biến tế bào hàng ngàytrong 5-7 ngày và so sánh với mẫu ựối
chứng.
Bảng 03-07. Kết quả theo dõi bệnh tắch tế bào (CPE) phân lập vi rút từ huyết thanh
TT Nguồn gốc Số mẫu phân lập Số có CPE Tỷ lệ (%)
1 Hải Dương 32 13 40,62
2 Bắc Giang 11 6 54,54
3 Quảng Nam 45 11 24,44
Tổng 88 30 34,09
Nhận xét: (1) Sau khi tế bào phát triển và phủ ựáy 100%, chúng tôi tiến hành gây nhiễm vi rút. Tế bào sau khi gây nhiễm ựược nuôi trong tủ ấm 370C có 3%CO2, và theo dõi bệnh tắch tế bào hàng ngày trên kắnh hiển vi trong vòng 3- 5 ngày (Tùy theo ựộc lực của từng chủng vi rút). Những mẫu có biểu hiện CPE sẽ ựược thu và bảo quản trong tủ lạnh -800C, ựến khi giám ựịnh lại sự có mặt của vi rút bằng các phương pháp khác.
(2) Tổng số 88 mẫu huyết thanh ựược phân lập cho kết quả 30 mẫu có CPE, tỷ lệ có CPE trung bình là 34,09 %. Tỷ lệ có CPE cao nhất từ mẫu có nguồn gốc ở Bắc Giang(54,54%), tiếp ựến là mẫu ựược lấy từ các tỉnh Hải Dương (40,62%), và mẫu ắt có khả năng phân lập ựược vi rút nhất ựược lấy từ Quảng Nam (24,44%), kết quả phân lập của chúng tôi cũng phù hợp với kết quả phân lập của các tác giả trên thế giới [12,45,21]. Việc phân lập ựược
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 50
vi rút phụ thuộc vào rất nhiều yếu tố như: cách lấy mẫu, bảo quản, vận chuyển mẫu, phương pháp phân lập, mật ựộ tế bào, môi trường dùng trong phân lập...[39,48].