Nhân tế bào Marc 145 trên phiến kắnh mỏng (la- men) trong 2 ựĩa 6 giếng
Bước 1:
Chai T75 tế bào bám ựáy 100%. Hút bỏ môi trường nuôi cấỵ
Bước 2: Trypsin
Cho 3ml Trypsin 1X tráng ựều mặt tế bàọ để tế bào rong tủ ấm 370C
cho tế bào tách nhau hoàn toàn
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 32
Bước 3: đánh tan tế bào
Cho 10 ml MEM 5% FBS ựánh tan cặn tế bàọ
Cho 10 ml huyễn dịch tế bào trong 30ml MEM 5% FBS
Ra ựĩa 6 giếng có la-men trong từng giếng 3ml huyễn dịch tế bào/giếng
Bước 4: Nuôi trong tủ ấm 370C 3% CO2 sau 2 ngày bám ựáy 100% dùng nhân giống PRRS.
Nhân giống vi rút PRRS
Tế bào Marc 145 nuôi cấy trong 2 ựĩa 6 giếng bám ựáy 100%.
Bước 1: Hút bỏ môi trường nuôi cấỵ Bước 2: Gây nhiễm vi rút.
Cho 50ộl huyễn dịch vi rút PRRS /giếng theo sơ ựồ:
1 2 3
A đC đC đC
B PRRS PRRS PRRS
Bước 3:
Nuôi trong tủ ấm 370C 3%CO2 theo dõi sự phát triển hàng ngàỵ
Bước 4: Theo dõi sự biến ựổi của tế bào
Sau 24 h, 48 h, 72h, 96h, 120h
Sử dụng dung dịch Hematoxylin và Eosin ựể nhuộm
Tế bào Marc 145 gây nhiễm vi rút PRRS sau 24h, 48h, 72h, 96h, 120h.
Bước 1: Cố ựịnh tiêu bản
Sau 24h, 48h, 72h, 96h, 120h lấy la-men gây nhiễm và la-men ựối chứng ra khỏi giếng nuôi cấỵ
Cố ựịnh tế bào trong Acetone trong 10 phút.
Gắn tế bào-la-men trên lam kắnh bằng MoutQuick. Bảo quản trong tủ âm.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ... 33
Bước 2: Nhuộm tiêu bản
Tiêu bản lấy từ tủ âm rạ
Nhúng tiêu bản qua hệ thống cồn 100% (1), 100% (2), 90%, 80%, 70%. Rửa tiêu bản bằng nước cất trong 10 phút.
Nhuộm Heamatoxyline trong 15 phút. Rửa tiêu bản bằng nước cất trong 5 phút. Nhuộm Eosin trong 5 phút.
Rửa tiêu bản bằng nước cất trong 5 phút.
Nhúng tiêu bản qua hệ thống cồn 70%, 80%, 90%, 100% (1), 100% (2). Chuyển nhanh tiêu bản qua Xylen.
Gắn phủ lên la-men ựã nhuộm bằng la- men khác. để khô tự nhiên và soi kắnh.