4.1. Phương phỏp thu thập mẫu.
4.1.1. Chuận bị ống nghiệm đựng sữa.
ẩng nghiệm được đỏnh số, hấp sấy vụ trựng. Nguyờn tắc đỏnh số: A: Vỳ trước trỏi.
B: Vú sau trỏi. C: Vỳ trước phải. D: Vú sau phải.
4.1.2. Chuẩn bị bầu vỳ và nỳm vỳ.
Dựng khăn mềm tẩm nước sạch lau toàn bộ bầu và nỳm vỳ và để khụ. Sau đú dựng bụng hoặc khăn lau sạch tẩm cồn 70 sỏt trựng toàn bộ bầu vỳ và nỳm vỳ. Sỏt trựng tay bằng cồn 70 trước khi vắt sữa.
4.1.3. Tiến hành.
Lấy vào ống nghiệm đó đỏnh dấu theo thứ tự khoảng 5 - 7ml sữa đặt thẳng vào giỏ xốp hoặc nhựa, xếp cỏc giỏ vào hộp bảo quản lạnh 4 - 6 C, vận chuyển nhanh về phũng thớ nghiệm xử lý trong 24h là tốt nhất.
Đối với bũ vỳ bị viờm nặng cú thể dựng kim thụng vỳ để lấy sữa.
4.2. Phương phỏp sử lý mẫu sữa.
Khi sữa được bảo quản lạnh, lớp chất bộo đụng lại cú thể bao lấy một số vi khuẩn và kộo chỳng nổi lờn bề mặt. Vỡ vậy muốn kết quả được chớnh xỏc, nờn làm ẩm mẫu bằng cỏch ngõm vào nước 37 C trong vũng 15 phút( khụng quỏ 15 phút ), lắc lạnh khoảng 25 lần trong 7 giõy để mẫu tan ra, trước khi sử dụng làm lại vài lần.
4.3. Phương phỏp kiểm tra mẫu sữa.
SƠ ĐỒ KIỂM TRA MẪU SỮA CMT Colifornia mactitis test Mẫu đã đợc xử lý EC Độ dẫn điện của sữa Dùng một số phản ứng đặc biệt để phân biệt, phân lập trên một số môi trờng đặc
4.3.1. Phương phỏp kiểm tra nhanh bệnh viờm vỳ( bằng thuốc thử CMT: Colifornia Mastitis Test ).
Là một phương phỏp đơn giản, dễ sử dụng cú thể ước lượng được sự cú mặt của tế bào tự thõn trong sữa qua đú đỏnh giỏ được hiện trạng bệnh viờm vỳ của đàn. CMT phản ứng với chất cú mặt trong tế bào tự thõn ở sữa nhờ cỏc gel. Cỏc phản ứng sẽ được ghi ở mức độ O,T,1,2,3 theo lượng gel khi ta trộn sữa với chất gõy phản ứng theo bảng sau( Theo Nelson philpot w,[33]).
Điểm Đỏnh giỏ O Khụng phản ứng T Phản ứng nhẹ 1 Phản ứng nhẹ trung bỡnh 2 Phản ứng trung bỡnh 3 Phản ứng mạnh
Phản ứng CMT cho phộp xỏc định kết quả bằng mắt thường ở 5 mức độ khỏc nhau với cỏc thang điểm õm tớnh, nghi ngờ và dương tớnh cú thể cú thể thớch hợp giỳp cho chủ vật nuụi bũ sữa bỡnh thường cũng cú thể giỏm sỏt được tỡnh trạng sức khoẻ của cỏc bầu vỳ.
- Lấy 2ml sữa cho vào cỏc khay nhựa 4 lỗ theo thứ tự A, B, C, D. - Nhỏ một lượng tương đương thuốc thử CMT vào.
- Nghiờng qua nghiờng lại khay nhựa, đọc phản ứng sau vài giõy. Thạch máu
S.B.A
Chọn những khuẩn lạc, khác nhau làm tiêu bản nhuộm Gram, kiểm tra hình
- Đỏnh giỏ phản ứng CMT theo thang điểm sau: theo Walter J. Gibbson, (1963)[41]; Akira Anri, (1996)[21].
Thang điểm CMT Biểu hiện
Lượng SCC trung
bỡnh
Dao động tương đối của mức độ SCC. O: õm tớnh (-) Hỗn hợp khụng cú biến đổi gỡ. 100.000 ít hơn: 200.000 T: cú dấu hiệu nghi ngờ( ). Hỗn hợp cú vẩn nhỏ li ti, để một lỳc thỡ tan ra. 300.000 150.000- 500.000 1:nghi ngờ(+) Hỗn hợp cú vẩn đục nhưng khụng nhớt. 900.000 400.000- 1.500.000 2:dương tính(++) Nhanh chúng hỡnh thành một cục nhớt dớnh từ trung tõm hỗn hợp. 2.700.000 800.000- 5.000.000 3:dương tính(++ +) Hỗn hợp kết dớnh thành khối chắc dớnh, khi lật nghiờng khay thử cũng khụng bị rớt xuống.
8.100.000 Thụng thường > 5.000.000
Sự tập trung tế bào thõn cao trong sữa( > 200.000 tế bào/ml) là dấu hiệu khụng bỡnh thường của bầu vỳ.
4.3.2. Kiểm tra viờm vỳ phi lõm sàng bằng phương phỏp đo tớnh dẫn điện của sữa ( EC).
Phương phỏp đo độ dẫn điện của sữa cũng là một phương phỏp dễ thực hiện được thực hiện hoàn toàn bằng mỏy và thụng qua số liệu hiện lờn trờn mỏy ta cú thể xỏc định được vú nào bị viờm, hay cả bầu vỳ bị viờm, và cũng nhờ phương phỏp này mà chỳng ta cú thể phỏt hiện được bệnh viờm vỳ phi lõm sàng một cỏch sớm nhất chỉ sau 4 - 6 giờ khi vi khuẩn bắt đầu xõm nhập và tấn cụng vào bầu vỳ.
* Cỏch làm:
- Bước 1: Bật mỏy.
- Bước 2: Lấy khoảng 2 - 3ml sữa cho vào cốc đo của mỏy( trong cốc đo được cấu tạo bởi hai cực điện).
- Bước 3: ấn nút điện của mỏy đo, số liệu sẽ được hiện lờn màn hỡnh mỏy. Từ số liệu trờn qua tớnh toỏn ta sẽ xỏc định được kết quả bũ cú viờm vỳ hay khụng.
- Bước 4: Tớnh kết quả.
Theo phương phỏp: ở điều kiện sinh lý bỡnh thường, sữa cú độ dẫn điện tuyệt đối khụng vượt quỏ 6,2mS/cm, đõy là cơ sở để phỏt hiện bệnh.
Ngoài ra độ dẫn điện chờnh lệch - lấy giỏ trị EC thấp nhất trong số 4 vỳ làm điểm 0, tớnh chờnh lệch giỏ trị EC của cỏc vỳ cũn lại so với giỏ trị thấp nhất đú nếu vượt qỳa 0,5mS/cm, thỡ vỳ đú cũng được chẩn đoỏn là bị viờm.
Giỏ trị ngưỡng để đỏnh giỏ sữa bi bất thường và bị viờm nhiễm nh sau: a: Độ dẫn điện tuyệt đối: Trờn 6,2mS/cm
b: Độ dẫn điện chờnh lệch: Trờn 0,5mS/cm.
Mẫu sữa Thạch mẫu 5% mỏu cừu S.B.A. Tủ ấm 37 C 18 - 24h. Chọn khuẩn lạc đặc trưng Khuẩn lạc mầu xỏm, lồi, ẩm. Nhuộm Gram. Nhuộm Gram. Gr(+). Gr(-)
Catalaza.KOH KOH +
+ -
Macconkey Staphylococci Streptococci Streptococci Tủ ấm 37 C 18 - 24h. Coagulaza CAMP Khuẩn lạc màu + hồng cỏnh xen + hồng cánh xen + - ngoài rỡa phủ lớp - ngoài rìa phủ lớp
sương mự Escalin
S.aureus CNS
KOVAC- CNS: Staphylococcus mụi trường. - CNS: Staphylococcus mụi trường.