3. ðỐ IT ƯỢNG, ðỊ Að IỂM, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
3.4.2.Thiết kế thớ nghiệm
Thớ nghiệm ủược thiết kế theo dạng ngẫu nhiờn hoàn toàn và ủược lặp lại 1 lần trờn cựng nhúm lợn thớ nghiệm. đõy là thiết kế thớ nghiệm ủó ủược cỏc chuyờn gia của dự ỏn từ trường Southern University of Denmark ủồng ý. Cụ thể là ởủợt thớ nghiệm thứ nhất (giai ủoạn 1), 12 lợn thịt cú khối lượng 20-25 kg sẽủược bố
trớ ngẫu nhiờn vào 12 ụ thớ nghiệm. Lợn ủược nuụi thớch nghi dưới chuồng nuụi cỏ thể trong thời gian 14 ngày. Sau ủú lợn thớ nghiệm ủược chuyển lờn cũi trao ủổi chất và nuụi trong 7 ngày thớ nghiệm ủể tiến hành thu phõn và nước tiểu. Sau khi
ủợt thớ nghiệm 1 kết thỳc, gia sỳc ủược cho nghỉ 30 ngày rồi lại ủược bố trớ ngẫu nhiờn trở lại vào 12 ụ chuồng nuụi cỏ thể như ở ủợt thớ nghiệm thứ nhất. Trong thời gian nghỉ giữa hai ủợt thớ nghiệm này gia sỳc ủược cho ăn cựng một loại thức
ăn (ủược xõy dựng theo tiờu chuẩn NRC 1998 cho lợn choai 45- 60 kg) nhưng khỏc nhau ở lượng cho ăn nhằm tạo cho lợn thớ nghiệm cú khối lượng tương
ủương trước khi bố trớ vào ủợt thớ nghiệm 2 (giai ủoạn 2). Do lợn thớ nghiệm ủược nuụi cỏ thể trờn cũi trao ủổi chất nờn tổng số mẫu cho mỗi khẩu phần thớ nghiệm là 8 mẫu. Sơ ủồ bố trớ thớ nghiệm cho hai ủợt thớ nghiệm ủược trỡnh bày ở Bảng 3.2. Bảng 3.2 Sơủồ bố trớ thớ nghiệm Phõn bố lợn thớ nghiệm1 Thức ăn cho ăn Số ngày nuụi KP1 KP2 KP3 Giai ủoạn 1 1,35 kg/con/ngày 14 ngày thớch nghi và 7 ngày thớ nghiệm thu mẫu 1, 6, 10, 11 7, 12, 4, 8 5, 3, 2, 9 Giai ủoạn 2 (lần lặp lại 1) 2,1 kg/con/ngày 14 ngày thớch nghi và 7 ngày thớ nghiệm thu mẫu 2, 4, 12, 9 5, 6, 3, 1 10, 11, 7, 8
1:
1, 2, 3 ...là số tai của lợn thớ nghiệm
3.4.3. Cỏc dụng cụ phục vụ thớ nghiệm
Ớ Tỳi nilon tối màu và hộp nhựa dựng ủể thu cất mẫu.
Ớ Cũi trao ủổi chất (12 cũi)
Ớ Cõn ủồng hồủể cõn thức ăn và chất thải (phõn, nước tiểu) thải ra
Ớ Dụng cụ thu phõn và nước tiểu (Khay hứng và xụ nhựa)
Ớ Dụng cụ trộn ủều phõn trước khi lấy mẫu
Ớ Dụng cụ dọn rửa chuồng thớ nghiệm
Ớ Tủ lạnh thường, tủ lạnh sõu ủể bảo quản mẫu.
3.4.4. Phương phỏp xỏc ủịnh tỷ lệ tiờu húa in vivo
Phương phỏp tiờu chuẩn xỏc ủịnh tỷ lệ tiờu húa in vivo (phương phỏp thu phõn và nước tiểu tổng số) của thức ăn cho lợn trờn cũi trao ủổi chất ủược ỏp dụng ủể xỏc ủịnh tỷ lệ tiờu húa của cỏc chất dinh dưỡng trong khẩu phần thớ nghiệm. Ngoài ra thớ nghiệm tiến hành trờn cũi trao ủổi chất cũng cho phộp xỏc ủịnh tổng lượng chất thải tạo ra dưới dạng lỏng (nước tiểu) và dạng ủặc (phõn). Kết hợp với cỏc phương phỏp phõn tớch thành phần húa học của thức
ăn cho ăn và chất thải tạo ra ủể xỏc ủịnh lượng ảnh hưởng của hàm lượng prụtờin và xơ trong khẩu phần ủến lượng chất thải gõy ụ nhiễm khi lợn ủược nuụi bằng cỏc khẩu phần khỏc nhau. Chi tiết qui trỡnh thớ nghiệm ủược trỡnh bày dưới ủõy:
Giai ủoạn nuụi chuẩn bị thớ nghiệm (giai ủoạn cho ăn thớch nghi)
Sau khi ủó chuẩn bị xong gia sỳc (cõn khối lượng và phõn lụ) và dụng cụ
thớ nghiệm thỡ cho lợn vào chuồng và nuụi thớch nghi với thức ăn thớ nghiệm. Thời gian thớch nghi cũn cú ý nghĩa giỳp con vật cú thời gian bài tiết hết thức ăn cũ trong ủường tiờu húa, con vật làm quen với thức ăn thớ nghiệm. đối với lợn trong thớ nghiệm này, thời gian nuụi thớch nghi là 14 ngày. Mỗi lần cho ăn ủều
cõn khối lượng thức ăn cho ăn và thức ăn thừa ủể biết ủược khối lượng ăn ăn vào.
Ảnh 3.2. Lợn thắ nghiệm nuôi trên cũi trao đổi chất
Giai đoạn này tiến hành trong 7 ngày và trình tự công việc trong mỗi ngày nh− sau:
- Ngày thứ nhất: thu dọn chuồng sạch sẽ, đặt sàng thu phân và cân khối l−ợng lợn tr−ớc khi đ−a vào thắ nghiệm, cho lợn ăn và lấy mẫu thức ăn cho ăn để phân tắch.
- Ngày thứ hai: thu nhặt, cân, ghi chép l−ợng phân thải ra và thức ăn thừa (nếu có) của ngày hôm tr−ớc và tiến hành lấy mẫu phân, thức ăn cho ăn và thức ăn thừa (khối l−ợng phân thải ra và l−ợng thức ăn ăn vào đ−ợc tắnh cho 1 ngày, từ 8 giờ sáng ngày hôm tr−ớc đến 8 giờ sáng ngày hôm sau).
- Ngày thứ 3, 4, 5, 6, tiến hành t−ơng tự ngày thứ 2.
- Ngày thứ 7: tiến hành nh− ngày thứ 2, đồng thời cân khối l−ợng lợn sau khi kết thúc thắ nghiệm
* Cách lấy mẫu
- Thức ăn cho ăn đ−ợc lấy hàng ngày, tr−ớc lúc cho lợn ăn và bảo quản trong thùng kắn để nơi khô ráo. Đến cuối giai đoạn thắ nghiệm, toàn bộ thức ăn cho ăn đ` lấy trong 7 ngày đ−ợc trộn đều và lấy 1 mẫu chung để phân tắch các chỉ tiêu chất khô, chất hữu cơ, xơ thô, prôtêin thô (N), mỡ thô, phốt pho.
- Thức ăn thừa của mỗi ngày thắ nghiệm giai đoạn thu phân cũng đ−ợc lấy mẫu và bảo lạnh. Vào ngày cuối cùng của thắ nghiệm, toàn bộ mẫu thức ăn thừa đ−ợc trộn đều và 1 mẫu chung đ−ợc lấy để phân tắch xác định hàm l−ợng chất khô chất hữu cơ, xơ thô, prôtêin thô (N), mỡ thô, phốt pho. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Phân của từng lợn thu đ−ợc sau mỗi ngày thắ nghiệm đ−ợc trộn đều rồi lấy mẫu với dung l−ợng khoảng 10% tổng khối l−ợng phân thải ra trong ngày. Mẫu đ−ợc cho vào túi nilon buộc kắn rồi bảo quản trong tủ lạnh sâu. Vào ngày cuối cùng của giai đoạn thu phân, mẫu thu đ−ợc mỗi ngày sẽ đ−ợc trộn đều nhau và 1 mẫu chung đ−ợc lấy để phân tắch xác định các chỉ tiêu chất khô, chất khô, chất hữu cơ, xơ thô, prôtêin thô (N), mỡ thô, phốt pho.
Ảnh 3.3. Thu mẫu và xử lý mẫu phõn và nước tiểu của lợn thớ nghiệm
- Nước tiểu của từng lợn thớ nghiệm cũng ủược thu hàng ngày vào buổi sỏng ngay sau khi ăn bữa sỏng. Cõn toàn bộ nước tiểu thu ủược rồi khuấy ủều, lấy khoảng 5% cho và lọ nhựa và bảo quản trong tủ lạnh. Sau ủú rửa khay hứng nước tiểu và ủặt trở lại cũi trao ủổi chất và cho 40 ml dung dịch H2SO4 30% vào khay ủể ngăn sự bay hơi của NH3. Cũng giống như ủối với mẫu
phõn, vào ngày cuối cựng của giai ủoạn thu mẫu, mẫu nước tiểu thu ủược mỗi ngày sẽ ủược trộn ủều nhau và 1 mẫu chung ủược lấy ủể phõn tớch xỏc ủịnh cỏc chỉ tiờu chất khụ, prụtờin thụ (N), phốt pho.
Cỏch tớnh tỷ lệ tiờu húa
Tỷ lệ tiờu húa của cỏc chất dinh dưỡng cú trong thức ăn ủược tớnh theo cụng thức sau :
Lượng dinh dưỡng ăn vào - Lượng dinh dưỡng thải ra trong phõn
TLTH =
x 100
Lượng dinh dưỡng ăn vào
Trong ủú:
Chất dinh dưỡng ăn vào (g) = Chất dinh dưỡng cho ăn (g) - Chất dinh dưỡng
ăn thừa
Chất dinh dưỡng trong phõn (g) = Khối lượng của phõn (g) x % Chất dinh dưỡng trong phõn.
3.4.5. Cỏc phương phỏp sử dụng ủể phõn tớch mẫu
Tất cả cỏc mẫu thức ăn cho ăn, và phõn gia sỳc thớ nghiệm ủều ủược phõn tớch thành phần húa học với cỏc chỉ tiờu: Vật chất khụ (DM), Nitơ tổng số (N), prụtờin thụ (CP), mỡ thụ, xơ thụ (CF), phốt pho (P) và khoỏng tổng số
(Ash). Phương phỏp phõn tớch sử dụng ủể xỏc ủịnh thành phần húa học của cỏc mẫu như sau.
- Vật chất khụ (DM): Xỏc ủịnh bằng phương phỏp sấy khụ ủến khối lượng khụng ủổi theo TCVN 4326 - 86.
- Nitơ (N): được xỏc ủịnh bằng phương phỏp Micro Kjeldahl trờn mỏy phõn tớch tựủộng KJELTECSYSTEM (Thụy điển) theo TCVN 4328 - 2001.
- Prụtờin thụ (CP): ủược tớnh từ hàm lượng N tổng số theo cụng thức CP (%) = Nitơ tổng số (%) x 6,25
- Mỡ thụ: xỏc ủịnh theo TCVN 4331-2001
-Xơ thụ (CF): Xỏc ủịnh theo TCVN 4329 - 86 trờn mỏy FIBRRETECSYSTEM (Thụy điển).
- Phốt pho (P): Xỏc ủịnh bằng phương phỏp quang phổ theo TCVN 1525-2001
- Khoỏng (Ash) : Xỏc ủịnh theo TCVN 4327 - 86