ñược cải tiến.
Qui trình chiết tách DNA tổng số cây lily:
- Cân khoảng 70mg mô lá non hoặc vảy củ cho vào cối.
- Bổ sung 1ml Buffer 1, nghiền nhuyễn rồi chuyển vào ống effendorf 1.5ml
- Ly tâm 1200 rpm trong 5 phút ở 40C. - Bỏ lớp dịch phía trên.
- Bổ sung tiếp 500 µl Buffer 2, trộn ñều bằng votex. - Ủ trong Waterbath ở 600C trong 10 phút.
- Bổ sung 500 µl dung dịch chloroform - isoamyl alcohol (24:1), trộn
ñều bằng votex, ñểở nhiệt ñộ phòng 15 phút.
- Ly tâm 12000 rpm trong 15 phút ở nhiệt ñộ phòng.
- Hút phần dịch phía trên (khoảng 500 µl) chuyển sang ống effendorf mới.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………88
(có thể giữ trong tủ lạnh -200C trong 30 phút hoặc hơn).
- Ly tâm 12000 rpm trong 5 phút ở 40C, ñổ bỏ phần dịch phía trên. - Bổ sung 700 µl ethanol 70%.
- Ly tâm 12000 rpm trong 5 phút ở 40C, ñổ bỏ phần dịch phía trên. - Làm khô DNA bằng cách ép lên giấy thấm.
- Bổ sung 50 µl TE, giữ mẫu trong tủ lạnh -200C.
* Chú ý: Trong quá trình tách chiết DNA tổng số cây hoa ly bằng qui trình trên có thể lặp lại từ bước 2 ñến bước 4, và lặp lai từ bước 7 ñến bước 9,
ñể tăng chất lượng của DNA tách chiết ñược. ðồng thời có thể bổ sung RNase
ñể tinh sạch hơn DNA.