Bảng 3.5. Kết quả chất lƣợng kháng nguyên
Kháng nguyên Yếu tố bất hoạt Đặc hiệu Thời gian ngƣng kết (phút)
Shigella dysenteriae Formol 5% (++) 2 100oC/2 giờ (+++) 1 Shigella flexneri Formol 5% (++) 2 100oC/2 giờ (+++) 1 Shigella boydii Formol 5% (++) 3 100oC/2 giờ (+++) 1 Shigella sonnei Formol 5% (++) 2 100oC/2 giờ (+++) 1
Qua bảng 3.5 cho thấy:
- Khi bất hoạt kháng nguyên Shigella dysenteriae bằng formol 5% thu kháng nguyên có tính đặc hiệu thấp, ngƣng kết ít (++) với kháng huyết thanh mẫu, thời gian ngƣng kết là 2 phút. Trong khi đó, bất hoạt kháng nguyên bằng nhiệt (100o
C/2 giờ) thu kháng nguyên có tính đặc hiệu cao, ngƣng kết nhiều và rõ ràng (+++) với kháng huyết thanh mẫu Shigella dysenteriae, thời gian ngƣng kết chỉ có 1 phút.
- Khi bất hoạt kháng nguyên Shigella flexneri bằng formol 5% thu kháng nguyên có tính đặc hiệu thấp, ngƣng kết ít (++) với kháng huyết thanh mẫu, thời gian ngƣng kết là 2 phút. Trong khi đó, bất hoạt kháng nguyên bằng nhiệt (100o
C/2 giờ) thu kháng nguyên có tính đặc hiệu cao, ngƣng kết nhiều và rõ ràng (+++) với kháng huyết thanh mẫu Shigella flexneri, thời gian ngƣng kết chỉ có 1 phút.
- Khi bất hoạt kháng nguyên Shigella boydii bằng formol 5% thu kháng nguyên có tính đặc hiệu thấp, ngƣng kết ít (++) với kháng huyết thanh mẫu, thời gian ngƣng kết là 3 phút. Trong khi đó, bất hoạt kháng nguyên bằng nhiệt (100oC/2 giờ) thu kháng nguyên có tính đặc hiệu cao, ngƣng kết nhiều và rõ ràng (+++) với kháng huyết thanh mẫu Shigella boydii, thời gian ngƣng kết chỉ có 2 phút.
- Khi bất hoạt kháng nguyên Shigella sonnei bằng formol 5% thu kháng nguyên có tính đặc hiệu thấp, ngƣng kết ít (++) với kháng huyết thanh mẫu, thời gian ngƣng kết là 2 phút. Trong khi đó, bất hoạt kháng nguyên bằng nhiệt (100oC/2 giờ) thu kháng nguyên có tính đặc hiệu cao, ngƣng kết nhiều và rõ ràng (+++) với kháng huyết thanh mẫu Shigella sonnei, thời gian ngƣng kết chỉ có 1 phút.
Trên cả 4 loại kháng nguyên khi bất hoạt bằng nhiệt 100oC/2 giờ đều cho thấy có tính đặc hiệu cao hơn, ngƣng kết nhiều và nhanh hơn so với bất hoạt bằng formol 5% khi làm phản ứng ngƣng kết với kháng huyết thanh mẫu cùng nhóm.
Kháng nguyên kích thích đáp ứng miễn dịch của Shigella chủ yếu là kháng nguyên thân, bản chất của chúng là lipopolysaccharide. Kháng nguyên này đƣợc tạo từ các đƣờng đơn, phân tử của chúng là dạng mạch xoắn với sự trùng lập các quyết định kháng nguyên ở trên phân tử, trong số các quyết định kháng nguyên có quyết định kháng nguyên bị che lấp. Sự nhận diện các quyết định kháng nguyên bởi các lympho bào là điều kiện cần thiết mở đầu cho đáp ứng miễn dịch [1,19]. Do đó trong sản xuất cần có phƣơng pháp xử lý kháng nguyên phù hợp làm thế nào để có nhiều quyết định kháng nguyên đƣợc bộc lộ nhằm làm cho các lympho bào có khả năng nhận diện dễ
dàng nhất. Vì thế chọn một phƣơng pháp xử lý kháng nguyên thích hợp trong quá trình nghiên cứu là rất cần thiết.
Từ kết quả trên chúng tôi có nhận xét:
Khi bất hoạt vi khuẩn bằng formol, nó đã làm biến tính và phá hủy một phần cấu trúc kháng nguyên của trực khuẩn có thể đã làm giảm đi các nhóm quyết định kháng nguyên. Còn khi bất hoạt bằng nhiệt kết hợp với rửa nhiều lần bằng acetone không làm biến tính kháng nguyên mà lại làm bộc lộ đƣợc các quyết định kháng nguyên bị che lấp và nhờ thế mà kháng thể tiếp xúc đƣợc dễ do đó tạo đƣợc sự ngƣng kết nhiều hơn (+++).
So sánh kết quả thu đƣợc ở trên chúng tôi chọn yếu tố bất hoạt bằng nhiệt, rửa bằng acetone để thu kháng nguyên đƣa vào gây miễn dịch thu kháng huyết thanh.
Nhƣ vậy với điều kiện nuôi cấy trực khuẩn Shigella ở 37oC/22 giờ trên môi trƣờng thạch dinh dƣỡng sau đó bất hoạt bằng nhiệt sẽ thu đƣợc kháng nguyên đạt chất lƣợng dùng để gây miễn dịch.