b) Cơ chế tác động của enzyme pectinase
3.3.5.1. Enzym trong phân tích (đặc biệt là phân tích chất độc hóa học).
- Ancetylcholinesterase là một ứng dụng quan trọng của enzym trong quân sự để phát hiện các chất độc thần kinh có chứa trong phospho hóa tri V như zoman, zarin. Phương pháp hóa học chỉ phát hiện được các chất độc ở nồng độ lớn gấp 10000 so với liều chết. phương pháp enzym có độ nhạy 106 so với phương pháp hóa học.
- Dùng urease hoặc peroxidase cho phép đo Hg2+ ở nồng độ 10-6 mg/ml - Dùng màng có enzym cố định để phủ lên điện cực để phân tích. - Thí dụ: dùng điện cực enzyme glucoseoxidase để phân tích glucose:
+ Phủ màng polystyrl hoặc gel polyacrylamide có glucoseoxidase cố định lên điện cực platin. Trong màng điện cực cố định glucoseoxidase xảy ra phản ứng sau:
Glucose + H2O + O2 glucoseoxidase acidegluconic + H2O2
+ Điện cực ghi lại tín hiệu H2O2, sản phẩm sau phản ứng. Qua đó, xác định glucose, cơ chất cần phân tích, hoặc:
Glucose + benzoguinon glucoseoxidase acidegluconic + hidroguinon +H2O Hydroguinon được điện cực platin ghi lại như sau:
Hydroguinon Platin benzoguinon +2H+ + 2e-
Tương tự như vậy:
- Dùng điện cực thủy tinh để phủ màng gel polyacrylamide có urease cố định để phân tích ure:
- Dùng điện cực phổ được phủ màng gel polyacrylamide có alcohol_oxiredutase cố định để phân tích alcohol (methanol, ethanol);
Alcohol Alcoholoxireductase Formaldehyde + H2O2
3.3.5.2.Xác định carbohdrate.
Trong thực phẩm, carbohdrate chiếm khối lượng lớn và đóng vai trò quan trọng trong dinh dưỡng. các loại đường là những đối tượng được phân tích thường xuyên.
Glucose. Glucose được xác định bằng phương pháp enzym hexokinase. Phản ứng của quá trình đó xảy ra như sau:
D-glucose + ATP → ADP + glucose 6-phosphate
Glucose 6-phosphate + NADP+ → D-gluconate-6-phospate + NADPH + H+
Fruxtose. enzym hexokinase cũng tác động lên fructose. Ta có thể xác định fructose sau khi xác định glucose.
D-glucose + ATP → ADP + fructose 6-phosphate Fructose 6-phosphate → gluconate-6- phospate
Galactose. Galactose được xác định theo phản ứng sau:
D-galatonic acid + NADH +H+ → D-galactose +NAD+
Mannose. Xác định mannose tự do theo phương trình sau:
hexokinase
Glucose 6-phosphate dehydrogenase
Glucose phosphate isomerase
Galactose dehydrogenase Phosphomannose isomerase
D-mannose + ATP → ADP + mannose 6-phosphate
mannose 6-phosphate → fructose-6-phospate
Saccharose. Saccharose thường không có trong tế bào động vật. Xác định saccharose theo phương trình sau:
saccharose + H2O → D-glucose + D-fructose
Maltose. Xác định maltose theo phương trình phản ứng sau maltose + H2O → 2-D-glucose
Lactose. Lactose thường có trong sữa. xác định lactose theo phương trình phản ứng sau:
Lactose + H2O → D-galactose + D-glucose
Rafinose. Rafinose có trong củ cải đường. xác định theo phương trình phản ứng sau:
Rafinose + H2O → D-galactose + saccharose
Tinh bột. tinh bột có nhiều trong thực vật và có cả ở một số loài VSV. Xác định tinh bột theo phương trình phản ứng sau:
Tinh bột +(n-1) H2O → n-D-glucose