2.2.2.1. Phương pháp phân lập mẫu trực tiếp và pha lỗng mẫu theo
Uyenco, 1988[58], [78]
a- Lấy mẫu và pha lỗng mẫu
Lấy 10g mẫu lá, đất, thân, cho vào túi lọc mẫu, thêm 90ml nước biển
Dập mẫu bằng máy nghiền mẫu trong vịng 2 phút, tốc độ 230 vịng/ phút. Túi lọc mẫu giữ lại chất hữu cơ, phần dịch hơi đục chảy ra bên ngồi. Lấy dịch lọc ta được dung dịch pha lỗng 10-1.
Lắc đều, rồi hút 1 ml dung dịch 10-1 cho vào ống nghiệm chứa 9ml nước biển vơ trùng ta được dung dịch pha lỗng nồng độ 10-2.
Tiếp tục pha lỗng như thế ta được dung dịch nồng độ 10-3, 10-4, 10-5.
b- Cấy mẫu
Nhỏ 2 giọt dung dịch ở mỗi nồng độ lên đĩa petri chứa MT1, MT2, MT3. Dùng que trang trải đều khắp mặt thạch. Sau đĩ sử dụng que trang đĩ trải tiếp hai đĩa tiếp theo.
c- Ủ mẫu
Lật ngược đĩa petri, gĩi vào giấy báo cũ, ủ ở nhiệt độ phịng từ 3 – 7 ngày. Chọn KL riêng rẽ cấy truyền sang ống nghiệm thạch nghiêng.
d- Làm thuần
Lấy một KL riêng rẽ trong ống thạch nghiêng, hịa vào nước biển vơ trùng, trải lên đĩa lần hai. Nếu các dạng KL đồng đều, cĩ màu sắc giống nhau, soi dưới KHV đều cĩ một dạng tế bào chứng tỏ giống phân lập thuần khiết.
Sau đĩ chọn KL riêng rẽ cấy truyền sang 3 ống thạch nghiêng để bảo quản và nghiên cứu các đặc điểm hình thái sinh lí, sinh hĩa.
2.2.2.2 Phương pháp bảo quản giống nấm sợi trên MT thạch cĩ
lớp dầu khống [6]
Dầu khống là parafin hay vaselin, hấp vơ trùng ở 1210C trong 2 giờ rồi sấy khơ ở 1700C trong 1- 2 giờ, để nguội.
Chuẩn bị 3 ống giống đã nuơi ở nhiệt độ phịng và thời gian thích hợp.
Đổ lớp dầu khống đã vơ trùng lên bề mặt. Hàn kín ống nghiệm bằng parafin bảo quản ở nhiệt độ 40C.